慢病毒感染细胞

huangcong1988

回复 rexhz 的帖子2 ^' h9 z4 g" s( x$ D# U- q$ L

( e+ W8 |+ n/ K$ f没，我用定量测的，所以不算准确，但是基本能反应问题（提RNA，反转录，定量，有些RNA没提出来，但是也有些病毒没有感染活性），这个办法很费时费力，但没办法，不带荧光，只能这么苦逼啊

rexhz

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" i4 D* L- K5 h( G
, O% z! p( n& U9 v& |& a& ] 病毒滴度怎么定量测的？ELISA?

huangcong1988

回复 shihuijunm 的帖子
; I$ X6 L' E- ?* q; y# y+ V0 M1 m& \& X, G$ G) ~
谢谢你。我的质粒是不带荧光的，我用定量测定滴度（最后单位是：单位体积里面病毒颗粒数），不是MOI这个指数，所以我只能按照病毒数与细胞数比例做感染，有什么办法能转换MOI这个指数跟我的滴度单位吗？还有，如果要买带荧光的质粒，在哪里买呢？是addgene吗？准备换质粒，我这个质粒系统太落后了

shihuijunm

2008年，In-Hyun Park等人发表在Nature protocols 上的题为“Generation of human-induced pluripotent stem cells ”的文章中，在第44步中提到，加入MOI为5 的OSKM病毒和MOI为1的hTERT和SV40 LT，你也可以参考一下~

huangcong1988

回复 yuheng 的帖子
0 b9 X! ]: P( u- V; U& q* q) Z
% g9 ?- n3 w# g6 a4 B  |, R, l谢谢

huangcong1988

回复 daviddow 的帖子
, D  f! w7 ^3 M7 V+ W1 t# h& t6 t  A% B7 q8 E
非常感谢

yuheng

我做慢病毒感染UC-MSC，MOI在1~16 时有很好的剂量依赖，16以上就不明显了，所以一般选择1个细胞加16个病毒。

daviddow

MOI=10

rexhz

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2 @( A6 E/ u$ a- |% R" @, D; S7 X6 X5 ~* h# s9 y' }0 y
没有GFP的话很不好估计，还有一种办法就是要去找IPS做你这种细胞的文献，一般文章都会说10mm dish 里面加入病毒多少ul 病毒滴度为多少。这样你就可以根据你的病毒滴度来换算。我是做病毒感染鼠间充质细胞，MOI为1，就是一个病毒感染一个细胞。
% y( M9 ]! \1 B1 W( v: q4 u( ]
8 [$ k; Y5 y5 `: MMultiplicity of Infection (MOI) is the number of transducing lentiviral particles per cell.  8 |, f( M% h) |) B6 l
It is highly recommended that for each new cell type to be transduced, a range of MOI
6 R2 j! S- j8 w2 _/ c4 pbe tested.   ) N5 R( }" F3 M

8 V  d9 e: {: ?& _4 D/ L+ f8 pTo calculate:  (total number of cells per well) x (desired MOI) = total transducing units
0 p& E# p8 y7 @needed (TU) 4 H- d  t$ v$ K( I) ]! [) x! r& J; C

1 C: }+ v$ ~: e) t7 ^! w(total TU needed) / (TU/ml reported on C of A) = total ml of lentiviral particles to add to ' [! M* B8 m9 k$ I" y5 ]
each well

huangcong1988

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$ f7 K* P1 T1 ?/ p" t/ y: {- ^- p# n) C5 A
我这个载体不带荧光啊，所以没法目测感染效率，所以只能用定量测滴度，然后再摸条件，摸病毒与细胞比例，不过我觉得这个麻烦，所以想问一下大家，一般是什么比例？个人觉得应该是病毒比细胞多吧？还有，各个病毒比例不是1:1么？你是说包装病毒还是用病毒感染供体细胞？