慢病毒感染细胞

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可以先测定最佳感染复数MOI

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9 |0 l5 i4 o; {+ P
9 g/ L) |% ~9 o- wMOI就是测用多少病毒来感染细胞。一般用空载来做。你要做加入病毒量的梯度10ul,50ul,100ul,,，统一感染已知数量的细胞（比如一个dish中长满你的细胞大概是多少的细胞数目）然后估算细胞被感染上的比例，当病毒量增高，而被感染率没有明显增高时，那个梯度就是最佳的病毒用量。一般都是80%的细胞被感染上的病毒的用量。这样以后就能根据不同的病毒的滴度来统一病毒用量。

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, [5 f1 j, U0 c/ D3 ~; G, U! }! p6 z5 |  J+ U/ x$ M, p4 x
没有GFP的话很不好估计，还有一种办法就是要去找IPS做你这种细胞的文献，一般文章都会说10mm dish 里面加入病毒多少ul 病毒滴度为多少。这样你就可以根据你的病毒滴度来换算。我是做病毒感染鼠间充质细胞，MOI为1，就是一个病毒感染一个细胞。6 J/ s7 G, [% o9 n& v0 \

0 J8 l0 k0 V0 q* cMultiplicity of Infection (MOI) is the number of transducing lentiviral particles per cell.  : Y& }; A: @' T
It is highly recommended that for each new cell type to be transduced, a range of MOI
  i+ v; z- r3 [; o5 i0 Sbe tested.   
) a; u/ u/ Z' L7 \ 3 l7 ]8 u- _3 o3 C7 C1 s
To calculate:  (total number of cells per well) x (desired MOI) = total transducing units
+ v5 h5 L3 W+ _( {" v# S, Wneeded (TU) ) b& B5 p5 S0 H' C

5 W8 k6 ?% c* T% r(total TU needed) / (TU/ml reported on C of A) = total ml of lentiviral particles to add to 3 L% W) [# s% b5 E5 Y5 N/ \9 N! ?
each well

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回复 huangcong1988 的帖子- i# m: d- r4 }" ^  p% b3 T% n1 t
$ X+ u1 r! y- h; }+ C
病毒滴度怎么定量测的？ELISA?

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回复 huangcong1988 的帖子$ N) Q; D1 Q) Y. x$ y- I2 c- r

1 I* M$ N7 N& A8 r* r, t还是提早换质粒吧，没有报告基因的慢病毒不好做

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回复 huangcong1988 的帖子7 V2 V  z5 G/ |9 s
3 t! n- z+ `( A
我用的是第二代系统，现在都出到第三代了。可以从addgene上面买，不过做IPS的现在国内人很多，可以找人要

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回复 huangcong1988 的帖子+ A8 R4 t5 E  H! x! W4 r  E

2 w2 P7 o( J. o7 r; E3 e" k我的也是老板以前从国外带回来的，国内能不能要到看老板人脉了