流式细胞仪分选细胞需要多大的细胞量

wangfang

流式细胞仪分选细胞需要多大的细胞量啊 ，分选之前需要准备什么吗 具体步骤是什么

hybaoyu

同问/ b' ~" U# Z7 I6 X. h$ d

精神病院小萝卜

这个不同的流式仪是不是起始量要求的不一样？我们实验室用的BD的一台，起始量要求是10^6细胞，步骤就是先将组织制成单细胞悬液，过膜去除杂质，洗涤之后染上荧光，就可以上机分选了。

evial

Mofol的话随便多少都可以，只要有你要的细胞存在就可以分出来，灵敏度高速度快。不是需要多少细胞的问题，是你的后续试验要多少细胞的问题

evial

制成单细胞悬液，封闭，染色，洗掉，过滤后上机。

抹了个茶

moflo-xdp 没有限制 都可以分

frankieisme

这个跟染色的方法和要求有关，单染肯定需要的比双染少，一般至少需要１０的５次方个细胞，细胞数越多，实验耗时越短．

暮色英雄

我也顺便搭个车咨询一下，做流式需要哪些试剂？因为我明天要去做流式，是用流式检测细胞膜上的表面抗原CD44和CD24的阳性阴性表达率，我们这里没有流式分选仪，要到别的地方去做，那边让我自己带上所有试剂，但是我不知道需要哪些试剂，希望高手能解答一下，谢谢了！

frankieisme

一抗(带荧光的)或者是一抗加带荧光的二抗.还有你要知道对方机器对你的标记是否识别.还有做样品之前要做好阳性对照和阴性对照的样品(针对荧光的,不是实验分组).

暮色英雄

回复 frankieisme 的帖子6 o5 `& i& ?" D
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不好意思，我从来没做过流式，对这方面概念不太清楚，能否再说详细一点。我这里有一抗，不带荧光，有单独的带荧光的二抗。做免疫细胞化学那些东西也需要吗，比如多聚甲醛固定液，山羊血清，PBS，Triton-X100，DAPI显色液，防荧光淬灭剂这些东西？另外阳性对照和阴性对照是什么东西呢？非常感谢！