用sto cell 做mES 饲养层细胞的疑惑~~

精神病院小萝卜

之前养的mES用MEF做feeder，状态很好，这学期要做电转后加药筛选，因为MEF不带抗性，就用了STO-lif-neo作为feeder养es细胞，但是es养在sto上状态很不好，每天都换液长4~5天克隆都长不大，而且养几代就有分化的趋势。有血清和无血清的培养液都试过了，一样的。但是把sto上的es养回MEF上，状态就逐渐恢复了，克隆又可以长得很大很圆了，这是怎么回事呢？是sto根本不适合做feeder吗？还是我在sto上养的时候用的培养液不对呢？我用的是10%KSR+7%FBS的培养液。请大家指教，谢谢！

subenjinwo

不会吧，我准备使用STO作为饲养层呢，但是还没有做，到时联系。

懵懂干细胞

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$ R& S* H$ d. q8 E5 W, p
2 P1 _+ X- m* ^8 s8 n' C6 s0 s' B我电转后药物筛选用的也是没抗性的MEF做饲养层，虽然药物加了之后MEF会死亡，但是一般药物筛选一次也就1.5-3天，这么一点时间来说，死亡了MEF对ES细胞状态影响也不会是很大的吧，勤一点传代，传代后，ES细胞状态照样恢复，接着做吧，没问题的！

精神病院小萝卜

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2 P! l0 V8 s& H9 _我的细胞要同时用嘌呤霉素和新霉素双筛10天左右，不能传代，等到克隆长到肉眼可见的大小之后挑克隆做PCR验证，所以MEF是肯定不行的了

懵懂干细胞

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; ^3 Y" {# W8 ]% b# q: s* u; [( A" F
你是在做基因打靶吧，谁让你10天不传代的啊？ ES细胞克隆3天之内就可以长到很大了，几乎是肉眼可见了，而且你有没有想过肉眼可见的克隆重组率相比克隆比较小的高还是低呢？筛选那么长时间，我跟保证，状态好的全部都分化，状态不好的被你选中了。建议你去看一下2010年应其龙教授的P53基因敲除文献吧，nature上的。

是鸟就要去飞

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% p: e9 W( N* K3 l. @) k7 t8 P  c( {. b" o3 [& e/ h
首先我肯定，MES真的能在STO上养，可能是你的细胞有点偏好吧，呵呵。另外国外有一种四抗性的MEF，你可以找一下，我师妹就有。培养基可以适当改变一下。

精神病院小萝卜

回复 是鸟就要去飞 的帖子0 t% S* P% m( @1 M4 V5 p  e" N
) r; z( T' g6 l5 t# Y
培养基要怎么改呢？我试过15%的FBS，感觉更差呢~~

精神病院小萝卜

回复 是鸟就要去飞 的帖子# d  i8 L  I8 [% f5 z- c+ X

; ~. O7 i) m9 M+ {& S4种抗性的MEF？这个也太夸张了吧，那那个MEF是cell line可以一直传代的还是买那种带4个抗性的老鼠自己制MEF呀？

是鸟就要去飞

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8 l0 a3 T! H& ]4 A: c: b9 q" J7 E
是从4抗性的老鼠身上得到的

是鸟就要去飞

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' `) w8 t! A" v, j# I) G  D
' P# P8 [4 Q) M% ]5 {这个分析起来就多了，我也遇到过这样的事，有一株细胞，在sto上怎么养也养不好。最后换个培养系统就好了。当时转移到mef上，用15%KSR+knockout Dmem+谷氨酰胺+neaa+me-巯基乙醇+lif+ps(这个可不加）就养好了。而且要传几代才好。