养细胞的一些疑问

myrudy

我也来回答一下：! S" a/ H3 d/ I- ~7 d$ d
1，细胞培养箱的温度跟二氧化碳浓度对于成纤维细胞或者其它类型细胞影响是比较大的，特别是二氧化碳的浓度，我们用的培养瓶盖子是密封的，都需要把盖子拧松一周，否则细胞的PH值会很受影响的，每次从培养箱拿细胞出来，建议观察的时间不要太长，尽快放入到培养箱内。
, {& X: f' @. P8 G. I 2，血清的话，国产的血清虽然很多人也说用了没问题，但是与进口血清比较差别是非常大的，像293之类的细胞，用国产血清是没问题，但是比较娇贵的细胞，或是原代细胞，不建议用国产血清，血清的质量不好，细胞很容易衰老，形态也会变化，且增殖缓慢。
. h& R- U% I/ ]* E 3，培养箱湿度个人感觉要因细胞而异，我们也是记得才加，细胞状态没有特别的改变。我们通常会在钢盘里面加纯水，不加硫酸铜，因为硫酸铜会腐蚀。4 q) s# f. _6 C1 ~: y! I
4，细胞瓶里面的圆的，光亮的细胞如果是用PBS洗了之后还不掉的话，那就应该不是死细胞了，建议你每次传代更换新的培养瓶，能否消除这个现象，我们也会遇到这个情况，我觉得对细胞影响不大。/ q7 e& q9 W1 c+ m
5，血清，还有KSO等等这些的，在拿进细胞室只要用酒精喷一下就可以了，不需要紫外照射。 * x' `/ P/ z1 d6 V

myrudy

你的T25瓶盖上没有滤膜的话，瓶盖起码要拧松到可以抽动为止，只要瓶盖掉不下来。宁外，你的培养基配制的时间，建议每次配制2周内使用的量，也可能是培养基系统的缓冲能力下降。1 Z4 A# |& B4 b% l: S3 D8 k8 {
你的细胞建议做个支原体检测，看是否存在支原体污染的可能性。

myrudy

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( y9 ^$ [: C% R0 ^5 L5 ?9 W估计你用的是没有滤膜的，有滤膜的瓶盖很好认，你看一下康宁培养瓶的一整包的外包装，有瓶盖的不同规格。

myrudy

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1 G0 u4 m6 _/ F0 R' J, x上面这个图，就是有滤膜的盖子。

myrudy

回复 huangcong1988 的帖子1 a; f+ @. k4 z

  i: }! _% a" O! c" r1 N! ~3 Z. N6 Q- F" w; }% V' r) j& _
这个是没有滤膜的瓶盖，很好认。这个在培养过程中，如果细胞有二氧化碳的浓度要求 ，那就需要拧松瓶盖。

myrudy

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放心吧 我们一直这么做的 从来没有污染过