ESC分化为心肌细胞的方法

yumeixing

请教各位大侠ESC分化为心肌细胞的方法。

zpzp0312

先悬浮培养获得EB, R6 d9 c6 |! O. s8 L
转移到明胶包被的培养皿
# \9 O! K* E0 U& @- Q2 O' w! X9 V直接用DMEM+血清就可以
/ `+ `6 c3 l: p% W' b; z6 l! K2周就能看到心肌样搏动

cochongg

1状态好的ES# d3 D. p* Q: y1 T
2早上换液
: R+ P3 Y3 r7 D3四小时后消化
' H. \% n1 D) T7 j4 K% V4重悬后转到培养皿上! |$ Z' k6 ]- }* p
5六十到一百二十分钟沉淀
; Z; i2 S  ]% T/ L% `6收集悬浮细胞
' ?: R+ B) n7 U7重复5、6
& x) Y+ K) d0 g, A# t8接到普通不帖壁培养皿中7 e& z, j2 V) c' p9 o
9第二天换液（小心换，细胞没贴壁的）0 f" t+ S- M( h2 |5 X; A$ f+ G( G
10两天后吸出囊胚
  a" X$ {+ @; g6 ^2 f11接到明胶预先包被的贴壁培养皿中
) |' [3 k5 |9 Q- Y1 F6 p% m12三天到五天换一次液
' W" I, I+ x5 y3 w; r13不要天天镜检，多看无益; S9 ]: ]) Y5 `3 C/ d; o
14两周时间内细胞就跳了
  E. `9 Z  r7 ^5 q5 \3 `  b( U* X" q! p8 V. e; V9 b
注意：培养基一直用无LIF的普通高糖就ok了，血清加15%吧，
" C; ?2 N' Q' q+ ?0 d! w5 q长得快

cherrysung

学习了

yumeixing

谢谢了，正在实验中。
# o, c5 y# L! z  C, d8 ?2 f

yumeixing

请问铺明胶的作用是什么？0 y' n: ~/ }. W* D/ G

王乾

请问有没有具体的文献资料？

cochongg

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! G* r5 Y7 }; w% G, I! u2 q2 k8 L8 ^$ W8 {: i
让EB贴到板上，其实就是提供附着点（相当于模仿子宫壁），换液的时候不容易吹起，

cochongg

回复 王乾 的帖子" T5 [; z) _+ y4 h/ a

7 c, Y$ I6 D2 `; ^3 |. _$ d( U你要找2008年之后的文献才有，以前的没人做吧。
3 @/ o- |, B( T  L4 P我也没看过文献，偶然听说这个实验，就试着做，，都失败好几次，，，$ a  S7 P% M" _; l" c: G; v
细胞状态很关键

细胞海洋

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2 w5 j& t! I7 h4 r# w
1 a5 W, q1 g$ B! p$ ]7 `你询问谁 就点击对方回复贴中的回复按钮 然后输入内容 像我这样& P2 @" I5 c* V9 Q

; f& s: f) d' M1 e) L+ q否则他很难看到你的提问