请教关于脂肪间充质干细胞的提取

碧落bl

现在准备开始做毕业课题，是关于脂肪间充质干细胞的，现在提取是第一步，查了很多文献，了解了不少了，对于步骤现在已经很熟悉了，就是对于中间的一些关键的东西还是不怎么了解，希望能够得到各位做过的的帮助。
1 c, `) Y' N0 x. @8 T1、提取过程中用到的胶原酶我看很多都用sigma公司的，不过大家是从哪里买的原装的的，还是国内公司给分装的？# I2 g# }+ S3 B5 n
2、DMEM大家用的是高糖的还是低糖，之间有差别吗？  o3 H6 @* R& r& |9 a
3、都说提取小鼠，大鼠腹股沟和附睾的脂肪，腹股沟知道是什么位置，可是学解剖的时候没有印象那个位置有脂肪啊？附睾的脂肪量够吗？# l& ]( K5 u: z8 X! m
谢谢给位了！！！

冠忠

1.        基本上没有什么分别，买国内，国外都行。
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4 [) T9 Z# l+ E) M' Y( q4 V2.        我试过用DMEM做脂肪干细胞培养是不行，用a-MEM会比较好。
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' X  u) P: c" P; Z8 k) n3.        我是培养人脂肪干细胞。
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franty

胶原酶偶买的是分装的sigma的粉剂，1mg，自己配了1%的浓度，用起来效果还不错，而且100ml足够用了；培养脂肪间充质干细胞DMEM当然要用低糖，使用高糖的DMEM会影响干细胞分化潜力，不利于实验；我做的正是提取大鼠腹股沟脂肪，大鼠腹股沟皮下有个结构叫做脂肪垫，楼主做一次原代就知道了，但是第一次做要注意，不要剪得太深，只剪开表皮就可以了，脂肪垫就在皮肤下筋膜上，很表浅，剪得深了容易出血。大鼠双侧腹股沟脂肪量不多，一般用4只大鼠乳鼠可以接种1瓶细胞。祝楼主实验顺利！

jxaf3900824

建议培养液用a-MEM。胶原酶市面上的都差不多，只要不是山寨就行。