错在哪一步，望赐教！-------谈脐血分离EPC

542177563

具体步骤是：脐血稀释---红细胞裂解液裂解稀释后的脐血---取上清液-----再用密度梯度离心----吸取白膜层（白膜层不是很明显）---PBS洗两便---一部分养在DMEM中想得到MSC，另一部分养在EGM中为了得到EPC（用的是培养瓶，没有铺胶）------可三天后换液（换液时没有发现贴壁的细胞）------换液2天后发现瓶中仍没有贴壁的细胞。结果什么也没培养出来，步骤中哪一步错了，望赐教！

simed

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4 Z5 m( B* _8 v. P; y  r- y; i+ T% k8 C
请教下外周血分离EPC做法？我尝试了很多次都是分离效果很好却没贴壁

echo666

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: W% g9 q. D8 D8 }$ ?1 n0 M我们也养这个，要等到第4周才会出现EPC的增殖。

zxmflying

1 N& h. A; a* f6 _8 I8 U
+ W" G3 U0 `5 S0 u* T5 l( v+ w你太好了！

PercyLaw

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2 a5 {; q% [. \6 z' W& B2 l" i' S( F6 i  _" O" \; r+ Z; C+ k  `& R2 d
这个我是这么认为的，首先，我试过万汶，感觉效果不大好，不知道你那里做出来怎么样，它沉淀红细胞的效果是有的，但不那么好。后来我试验室的教授说试试明胶，效果就出人意料了。可以试试。

小公

回复 PercyLaw 的帖子6 h6 h  ]: \4 V

$ t2 x9 r' v$ \6 ^' G你好，我也是分离脐血单核细胞，先用羟乙基淀粉沉淀红细胞，后用ficoll 分离，密度 1.077，白膜层总是混有一些红细胞，

PercyLaw

个人认为，EPC这种细胞还是比较少而且娇气的，所以洗细胞可以试试用培液（不加血请的，最普通的那种，1640也可以），对细胞的损伤会比较小。

PercyLaw

另外，密度梯度离心Ficoll液：血液的比值是在离心管中高度的比，尽量两段都长一点，加血液的时候一定要慢，离心力宜小不宜大，时间长短可以自己摸索一下。而且有的朋友说，Ficoll液的厂家和质量也决定了白膜层的清晰度和分层情况。
' d/ U, H( Z1 ~. k7 E( z我个人感觉还真是不需要红细胞裂解的，直接在ficoll液中加稀释的血液应该就可以。

coffee.cat105

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$ i. Q) K7 R7 {# q回复 穿越地平线 的帖子
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8 I  Z+ n2 h: e6 J% D. M能发一份给我不？我们正要开始做，想要一份详细步骤，万分感谢，

evial

你太有才了，将红细胞裂解法和梯度离心法合二为一！本来外周血EPC就很少啊！洗来洗去的说不定就洗没有了，哈哈