小鼠尾部成纤维细胞的培养问题

christophe

不是除去毛，而是将皮全部剥离。0 \7 f# j: Q- O+ M8 Q% J& B/ ?
我告诉你具体方法吧：
9 J7 K0 z7 c0 D% l尽量剪长些鼠尾，如果小鼠不继续养了，就把鼠尾全部剪了。
0 d. |/ I/ B0 `/ f+ Z酒精中浸泡一下，然后放到PBS中，用剪刀或者刀片在尾巴粗端剪断处划一个小缺口，然后用尖头镊子夹住鼠皮翻转，夹牢翻转几圈以后，用力向下拽，整个尾巴的表皮就被翻转拽下来了，很完整的。将最上端剪去不要，剩下的再剪短放到medium中养就可以了，大概一周左右TTF就出现了。

christophe

是不是不大，但也不小，圆形透明的那种，但不会动？那不是染菌，正常的，再过两天，你仔细看平皿底部，会有MEF样的细胞贴壁就是了，至于这密密麻麻的颗粒可能是鼠尾迁移出来的TTF但还没贴壁铺展，或者其他种类的细胞。最好用贴壁性好些的平皿

christophe

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2 d+ m7 t: i$ G: @& b* p; V7 a! X% U- e8 p4 Z9 b4 g, s
刚好在线，给你回复了

christophe

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) u$ t. |) [6 F- V% o8 L* L3 n: e  i9 M% k
酒精只能抑菌不能完全杀菌。你取大一点的小鼠，成年小鼠可以取7-8cm长的尾巴，把外表皮剥离不要。我是以前做的，手头上现在没有。

christophe

回复 2006sw0657 的帖子1 j# z* e  ?6 n9 l) P

7 P7 ^% v" L( b- v+ F外表皮应该大部分都是角质层之类的吧，不会完全带走的，残留的细胞会慢慢爬出来。对，是将剥离表皮后剩余的软骨剪碎培养。剪碎后放入10cm平皿，多加一些培养基（我加20ml），放入后就不用管了，四五天以后再换液。
( z2 n8 H, M  t# f0 @2 V+ y4 b4 J放心，肯定能做出来的。" C" p# b" C  {2 {. f* I8 Z+ C
我用的CORNING的平皿，用之前gelatin包被一下。

christophe

好的，恭喜你！, J/ x2 c5 {5 [$ z9 u
无所谓吧，反正放在里面也不碍事，我是在第二次换液的时候除去的。

christophe

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* Q. D8 z2 x, z' W4 d* k* A
( m6 R, C) {( g肯定会有一些杂细胞吧，我原代细胞长好了以后消化计数一下就用来铺细胞做实验了，基本上算没传代。它是成体细胞，活力肯定不好，传代以后状态差是正常的吧。