脐血来源的单个核细胞诱导CIK，细胞增殖缓慢，什么原因呢？

mengnancy

脐血来源的单个核细胞诱导CIK，细胞增殖缓慢，什么原因呢？用淋巴细胞分离液分离单个核细胞时，没有出现明显的淋巴细胞层，而是与分离液混在一起，分离液对细胞有损伤吗？

chenguangyu

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& k5 f$ v2 k0 J8 [
, ^1 U# @$ t5 G" J1000uIL-2是不是有点高？觉得用不到那么高吧

lyj-0017

回复 wjp130 的帖子/ ~" V0 Z  b, m' z, ]/ O: u
' B1 S8 Z, h* D) I3 T6 C
      我认为应该不是血小板和红细胞的问题。用淋巴细胞分离液分细胞后，细胞经过几次清洗，血小板应该所剩无几；至于红细胞，到现在为止，我没发现对培养的CIK细胞有什么不利的影响。
2 l4 M' \6 ^/ [% }8 J/ B    你说的沉淀5分钟是啥意思，能具体讲一下吗？如果出现絮状物，这不是说明细胞已经死掉了吗？这些絮状物不也就会粘连细胞吗？

wjp130

回复 lyj-0017 的帖子0 H2 ~$ e$ h' J

3 g/ t* c& g  L8 j" W很少用外周血培养，关于絮状物，我分析了一下，外周血培养CIK，可能是单采血中的血小板过多，导致的细胞聚集，或者是红细胞裂解后的碎片，现在我已经基本解决，其实絮状物多也没什么，及时处理，我一般是采用沉淀五分钟的办法解决。

lyj-0017

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9 ~9 ~- g% ~9 _' [0 m
) V5 n! m/ F: Q* k$ N) k我们养的是外周血CIK，现在在培养过程中也发现培养初期细胞长得挺不错的，也是到了5-7天时出现小絮状物，细胞增殖变慢。请问你们现在解决这个问题了吗？是什么原因呢?多谢了

mengnancy

回复 jiefengbing 的帖子. _* R; |+ A9 ~6 X

# c/ f: m' _8 V! D+ H+ O; T' a8 b. q请问哪里能买到白蛋白，非常感谢。

realff

对你的第一个问题，我也怀疑你的离心效果不好，可能没有关注升速和降速的控制。同样是800g，如果用最快速度降速和缓慢降速，分层的效果差别明显哦。你没观察到清析的条带，吸取的细胞少，那么很可能会导致长不起来的。

细胞海洋

回复 wjp130 的帖子1 ?; {! Q* [5 R5 M, _1 ?

; J: v5 b. S- u  y* c  H5 K建议你发新帖提问

wjp130

回复 大少爷 的帖子1 t5 t9 t+ V1 d) [
# U' P8 {" ?  d' o0 L# e
请教，最近用脐血养CIK，开始都增殖很好，到8天左右时候，会出现小的絮状物，细胞增殖也变缓慢，甚至停止增殖，不知道是什么原因，我加的是脐血血浆，每天全量补充TL-2，请教了，谢谢

jiefengbing

在分离单核细胞时应当注意离心机的升速跟降速，并且最好用水平转头，你所说的没有分层，是否有这方面的原因所影响？一般来说，ficoll离心液应该问题不大。在从离心机取离心管的过程中，注意不要晃动。1 P5 {# g6 z7 Y( U8 k7 @
另外细胞增殖缓慢，可能跟培养体系有关系.takara的那种培养液培养CIK不太好，要是非要用那种培养液，应当加自体血清或者2%的白蛋白，下次你可以试试看。