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[请教] 悬浮细胞如何建立双荧光报告体系 [复制链接]

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楼主
发表于 2012-5-29 10:27 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
请教各位大虾,我打算使用EL4作为dual-luciferase report assay system 的目标细胞,可是因为是悬浮细胞,使用lipo转染按照说明书上的话要先将细胞离心,然后再使用无血清和双抗的培养基重新将细胞悬浮,转染过后4-6h又要再次将细胞离心再换上有血清和双抗的培养基,这样折腾细胞的状态会不会受到很大的影响啊,转染的效果还有保证吗?先谢过大家了
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优秀会员 金话筒

沙发
发表于 2012-5-31 01:09 |只看该作者
目前脂质体基本不受血清的干扰了,所以你直接转传代之后不用更换培养基就可以做转染了,转染后4-6小时不换夜对细胞的毒性基本也可以忽略不计,再由最后测luciferase的话(96孔板) ,也可以直接把检测也加到培养液中反应10min后就可检测.所以你的这些担心都可以解决.
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