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本帖最后由 myboluo 于 2012-6-4 14:14 编辑
5 x) h0 F9 c4 k' J! L3 @' U: z
! s) ]/ c# e' M, T' f要加,在缺少谷氨酰胺时细胞会因生长不良而死亡(参考自司徒镇南《细胞培养》)。因为谷氨酰胺在4℃下放置7天即可分解约50%,买的很多干粉或配制好的培养基都是不加谷氨酰胺的,可以按1-10mmol/L终浓度加。之后每两周需要再补一次(现用现加)。
& @* m8 [% ]0 y$ H$ |8 K1 W附上从丁香园某版主关于配制并分装100×谷氨酰胺溶液50ml的方法(网址:http://www.dxy.cn/bbs/thread/12957611#12957611)
* t$ Z( @8 r- K- b' P. {1、称取谷氨酰胺1.4600g,加50ml三蒸水,摇动,搅拌溶解使固体充分溶解(约需10-20分钟)
9 q, k6 P& r& R2 e _. J; k2、吸入干净,干燥的50ml注射器中(挑选注射器时要注意针筒和活塞的匹配,不然太紧,吸入和吹出液体都很费劲,会增加很多麻烦),转入无菌间* G1 X' Y7 U7 W; T: }3 X0 V
3、于超净台内,打开一无菌的100ml血清瓶,无菌操作,取出一滤头,插在注射器张(配制谷氨酰胺专用,不得挪作他用),缓缓将滤过的液体注入血清瓶(约需5-10分钟)
8 ~; b4 h3 i3 v+ [8 b3 f+ y+ `4、取1ml吸管,将谷氨酰胺分装入无菌试管(或1.5ml的EP管)中(每管1ml,可一次全部分装完毕(50管),拿出超净台,封口膜封口,
3 [) K# B4 [ p) f( _+ ]' C, i5、将分装好的谷氨酰胺放入-20度冰箱保存,注意不要将试管或EP管放倒,不要让液体浸到袋子上,最好让其直立,等溶液完全冻结后,再放倒保存。
3 D) |; p6 \6 {! O6、临用前,提前30分钟-1小时将一管(1ml)谷氨酰胺从冰箱取出放于室温化冻,(或者提前1-3小时充-20度取出,放于4度冰箱化冻),待谷氨酰胺全部融化后转入超净台,无菌操作,加入到培养基中,做好标签。) b6 c% ^5 H- u( Y
7、配制时不要试图配制更大浓度的谷氨酰胺贮存液,因为此时溶解会有困难。 |
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