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干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 干细胞之家论坛 免疫细胞治疗专区 【请教】请问培养基配制时需要加谷氨酰胺吗?
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【请教】请问培养基配制时需要加谷氨酰胺吗? [复制链接]

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楼主
发表于 2012-6-2 00:16 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
请教高手,培养基配制时需要加谷氨酰胺吗?如果需要加的量及间隔时间?
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沙发
发表于 2012-6-2 06:55 |只看该作者
个人认为如果你培养基中含有谷氨酰胺,就不用添加,但谷氨酰胺不太稳定,培养基配制后,可以-20度冻存保存,并在短期内用完;
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藤椅
发表于 2012-6-2 09:03 |只看该作者
如果培养基里有谷氨酰胺,可以不加。如果谷氨酰胺对你的细胞很重要,可以在用之前补充一点
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板凳
发表于 2012-6-4 11:13 |只看该作者
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建议加,谷氨酰胺容易降解,终浓度一般在10mmol/l,配完培基后16天内用完
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报纸
发表于 2012-6-4 14:02 |只看该作者
本帖最后由 myboluo 于 2012-6-4 14:14 编辑
% j1 y9 {. X6 w4 u7 T1 G" D
1 X) p+ B8 H0 n- w8 D$ K0 Y要加,在缺少谷氨酰胺时细胞会因生长不良而死亡(参考自司徒镇南《细胞培养》)。因为谷氨酰胺在4℃下放置7天即可分解约50%,买的很多干粉或配制好的培养基都是不加谷氨酰胺的,可以按1-10mmol/L终浓度加。之后每两周需要再补一次(现用现加)。
! c0 |5 `$ K3 A- U* V" j附上从丁香园某版主关于配制并分装100×谷氨酰胺溶液50ml的方法(网址:http://www.dxy.cn/bbs/thread/12957611#12957611)1 g& x& j0 L+ O0 p
1、称取谷氨酰胺1.4600g,加50ml三蒸水,摇动,搅拌溶解使固体充分溶解(约需10-20分钟)
9 v9 r6 j; t* T0 V2、吸入干净,干燥的50ml注射器中(挑选注射器时要注意针筒和活塞的匹配,不然太紧,吸入和吹出液体都很费劲,会增加很多麻烦),转入无菌间$ }- C0 ^" w9 c$ E
3、于超净台内,打开一无菌的100ml血清瓶,无菌操作,取出一滤头,插在注射器张(配制谷氨酰胺专用,不得挪作他用),缓缓将滤过的液体注入血清瓶(约需5-10分钟)
/ n8 g/ }1 d7 P0 S4、取1ml吸管,将谷氨酰胺分装入无菌试管(或1.5ml的EP管)中(每管1ml,可一次全部分装完毕(50管),拿出超净台,封口膜封口,6 w6 v+ e: o3 q
5、将分装好的谷氨酰胺放入-20度冰箱保存,注意不要将试管或EP管放倒,不要让液体浸到袋子上,最好让其直立,等溶液完全冻结后,再放倒保存。
1 |- Z. O: w3 y3 Z$ Z- H6、临用前,提前30分钟-1小时将一管(1ml)谷氨酰胺从冰箱取出放于室温化冻,(或者提前1-3小时充-20度取出,放于4度冰箱化冻),待谷氨酰胺全部融化后转入超净台,无菌操作,加入到培养基中,做好标签。
! x% w' T' ?3 e0 R' g/ W3 |6 n7、配制时不要试图配制更大浓度的谷氨酰胺贮存液,因为此时溶解会有困难。
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地板
发表于 2012-6-7 15:41 |只看该作者
这个问题我请教过Gibco的专家,他们的回复是要看细胞是否需要,干细胞是需要添加的,免疫细胞就不一定了。另外如果需要添加的,而且是加的普通谷氨酰胺一般两周要重新加入原浓度的谷氨酰胺,目前有比较稳定的谷氨酰胺衍生物,可以用衍生物代替谷氨酰胺。
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