请教下大家的mES都是怎么传代的？

vegetax4132

我是消化下来后在有明胶的培养基上静止30MIN， 然后吸上清传代，  但感觉每次传代后细胞还是很容易分化。请问大家都是怎么传代的？

YYQ6301

头疼呢，我们的细胞也是，现在一复苏出来就分化，以前不是这样啊，怎整

frankieisme

其实可以直接用枪头挑出克隆再吹打散后种到新的feeder上.你消化是用的什么胰酶?我们一般用Accutase。

细胞海洋

回复 BNJN 的帖子
3 P$ m9 @7 t% d" ~% q0 \
* q$ h( I( ~* w* T4 g你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样# Y' r$ P9 i) D* @6 ^" j

8 T& U" V" H4 Q8 d0 S' b否则他会看不到

BNJN

用KOSR试过，细胞在、跟打鸡血似的长得很快，分化少，但是后期EB往神经分化就不如FBS的好了

细胞海洋

回复 BNJN 的帖子. ^9 Z0 c. Q8 l% S" g  u/ `

1 `/ o5 B$ r9 C你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样# L2 w' r$ f- \9 v! f  @
- G" e2 Z; W" u2 B
否则他会看不到

scottist

回复 vegetax4132 的帖子& _8 ?0 {7 k0 F+ M+ D
0 B# M) z9 ?" @2 m( j% G
我和你却相反，一直用KSR，后来换成FBS就出现大量分化，最后换成KSR效果就好多了。因为最近Gibico的KSR进不来，所以你买的会不会是假货？此外，iPS最好一直用一种血清培养，如果改变的话也可能诱导分化。

BNJN

好的，只是当时老师刚回来，急着要好的细胞，就只能这样做了，现在半年多过去了，实验室稳定了，细胞也正常了

BNJN

你可以试试加入GSK3-beta、ERK、MAPK的抑制剂，我实验室有人试过，ESC就长好了，之后撤掉好的状态也没有消失。

chentian820

首先mESC的传代没有你说的这么复杂，直接像传普通的细胞即可。如果你的细胞容易分化，你就要考虑：1 LIF的浓度和质量 2 FBS最好用特级胎牛血清 3 你的耗材最好是一次性的那种 4 最关键的就是你的种子是不是已经分化了，建议你做一个免疫荧光看一下，检查一些多能型marker