请教大牛有人做过猪的BMP15启动子吗？请不吝赐教啊！

weiyepan

你是有启动子做不出转录还是启动子弄不到啊?

weiyepan

1. 是的，一般启动子集中在900~1500左右的区域，但也有在很上游调控的例子。不过在线的启动子预测一般是根据现有的数据库做的，单一个数据库做出来的结果不一定准确，你要先找对物种和Pol才能比较准确的预测出来。, G+ q6 r; S% `
2. 启动子一般比较难扩增，主要是区域内部GC分布不均匀。我们设计是从ATG前的序列开始，往3'端1500bp左右，主要看Tm不要看长度，一对引物要比较平衡，温度差最好不要超过5度。剩下的酶切位点就往5'端加就行了，加上去的序列不用算Tm值。如果想提高成功率，可以往外设计nest引物，特异性也会高很多，Tm的选择也会丰富很多。另外，PCR的时候加入DMSO和Betain，会增加产量。