求助各位大神，我想做有关神经球的双标免疫荧光

dianying

回复 changbo529 的帖子& R1 Q" R+ C1 p0 T

/ e1 H9 B. M! F染色不难，只是照相要用激光共聚焦照Z扫描才能把不同层面都照着。

dianying

回复 changbo529 的帖子
5 i3 n$ T" M3 O( e  f
; O$ S/ I) F) Y! f+ Y3 }种属的选择还需要看你用的细胞是从哪里来的--人还是动物？什么动物？一般你买的抗体都会有说明。) U1 n, b9 p. h7 C/ z1 m
抗体加入的时间没什么特别，双标用不同的种属同时加入就可以。加二抗以后的各步都要避光。

dianying

回复 changbo529 的帖子
9 I. ^  }" p: M# Y  n; ]
; [6 D9 u4 t0 u+ F5 zExample:3 J9 B4 \% W+ g& Y0 e

7 S: |) J" T: m6 E- J8 k: K; `1Ab: Polyclonal rabbit anti- Rat;
- j, R+ t8 p" n  z2Ab: Alexa Fluor 546 goat anti-rabbit or Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit
0 G# l- E1 q( ^! v* j% _! s8 w5 p4 Q' C
1Ab: Polyclonal mouse anti-Rat; " l  v" f' A- G
2Ab: Alexa Fluor 488 goat anti mouse or Alexa Fluor 546 goat anti-rabbit2 F. k/ T9 X& J$ E

7 X3 ]4 o/ I$ V0 J8 d6 L5 O: w! [5 L" q2 O1 h. R

dianying

回复 changbo529 的帖子
5 v# i; N2 X2 P5 ]( O) @7 U" D3 F6 v; @* A
我没做过大鼠，Protocol在网上也不应该难找吧。指导更谈不上，在染色上也是菜鸟水平。, t3 t. R8 i/ X9 o# I
封闭通常用BSA 或者NGS。9 E( P. q; @# e( v0 \5 e: z

! Y+ J) R/ T* }! w1 a  {

dianying

回复 changbo529 的帖子
. {( F" ?- O. A1 D, S, |
0 u' s: P4 M8 @7 P) [帮你找了个大鼠组织的单标中文视频，你需要双标就把两种不同属种的一抗加在一起就行，二抗加相应的就行。我只做过人和小鼠的，应该通用。
2 X9 S1 N) d: T) q! V或许等我有时间再帮你找找。9 B4 z* Q- p7 r- |# h) E6 L

7 F( x1 K6 \+ H( t$ ^http://v.youku.com/v_show/id_XMTY1MTI4OTY4.html

dianying

回复 asa_ok 的帖子
6 ^% B& U7 e' K2 \" o( T4 Y' l8 T1 c! D; G. T' x  K% e
不会。& t" |) |  H6 B6 _; Y0 J9 n
神经球下摇床，不涂胶就能贴壁。在染色过程中你用Triton只要打了孔，染进去没问题。只是你照像时要用共聚焦xyz，然后叠加起来就行。

dianying

回复 asa_ok 的帖子
: s( _5 X  `- ?7 C" |' \+ r
# U- C7 u7 y7 ^! t; ?* K( I5 Y可以。
! B! A5 e3 v; n$ F* ~triton 100x 5ul 加 5ml 1xDPBS 8-10min。