关于细胞RNA的提取

zhaonicholas

请教大家，我查阅了资料发现，一般6孔板每个孔长满后有2-5X10的6次方个细胞，一个孔就足够提取RNA了，而24孔板每个孔长满后细胞数目达到2.5X10的5次方个，如果我用24孔板种细胞，准备做细胞分化实验，以考察某些基因的表达，每4孔提一个RNA样品的实验是否具有可行性？如果有的话，24孔板接种时每孔应该种多少细胞？谢谢！

wangzhiqi86

看你是做什么分化了，成骨和成脂肪是5×103 cells/cm2的样接种到孔板（包括24和6孔）。RNA的抽提用Trizol法的化，细胞数在1×106以上就没问题了。我没记错的话，24孔孔板面积是1.9，6孔板接近10cm2。4个孔做一个样应该是可以的。

tinatina

其实现在有办法做single cell PCR,单个细胞就可以做cDNA扩增

dahui

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1 z& ^; f! A8 e您说的是ambion的那个产品吧》你实际操作过一个细胞嘛？效果怎么样？

echowdk

回复 zhaonicholas 的帖子  P6 T2 t& B) V$ o' ~
5 j2 g0 ]5 t1 k. T* p+ Z
其实我们实验室经常用24孔板的一个孔的ES细胞提取RNA，细胞数目没有具体统计过，但是铺板密度是2*105个，铺一天以后收细胞。不过我们一般是用QIAGEN的试剂盒提。

573639471

回复 echowdk 的帖子* {0 e4 i8 r$ L2 W

. u+ g0 k* i. O# C3 e小鼠ES吧？

linzi214

QIAGEN有微量细胞RNA抽提试剂盒，看文献最少细胞数目10000个都可以抽提出RNA的

ditiger

可以用微提试剂盒吧，问一下代理，应该可以的。
- t: c  m" [# e: bLZ做一次分化不容易，一定要提出来啊，呵呵。

zhaonicholas

回复 ditiger 的帖子( p% q# x9 Q' i+ d. b1 a  |' f

2 y9 \* X4 c8 c8 a7 q/ K, i; O谢谢哈！

zhaonicholas

回复 linzi214 的帖子7 W2 J: q  }* P  t9 P4 S+ o1 H5 f- o

; P' @/ m& }4 X# \% I谢谢了