干细胞支架共培养的PCR检测疑问

毛豆淡淡

脂肪干细胞接种在多孔复合支架上，如何进行PCR检测呢？怎样消化才能得到最大细胞量？谢谢指点。

相宜

我觉得你说的不够详细，没有明白你的意图

pailishi

可以把整个支架放到消化液（胰酶或其它替代品）里消化不？我没做过，设想而已？

Winston

支架剪碎后加入蛋白酶k裂解液，37度过夜，可以获得DNA

毛豆淡淡

谢谢大家的建议。再说详细点：细胞是大鼠脂肪干细胞；支架含羟基磷灰石、壳聚糖等的多孔复合型支架。接种7天，今天用PBS冲洗2次后，将材料-细胞复合体剪成小块，加入0.25%胰酶消化5分钟，并吹打50次左右，镜下观察，仍未见太多细胞出来。就又等待了15分钟，并终止消化，同样让人失望。郁闷的一天啊？望同道中人给予指点，谢谢大家！！！

毛豆淡淡

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( v6 K; _& e6 u7 R# o. ~2 H9 j  D/ \3 ~. K( e
试过了，不理想。头疼啊 。。。。。谢谢您的关注。

毛豆淡淡

回复 Winston 的帖子; ^% T2 N# b1 q0 D! ~. ?

1 d2 t" y' k6 {; H# {% l4 J5 G明天去实验室看看有没有这个裂解液，没用过。谢谢您！！！

毛豆淡淡

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谢谢关注，我下面说的详细些。望指点！！！谢谢！！

jj2570782

同学 你的材料粘附性有那么好吗？ 摇床摇摇 细胞就下来了

毛豆淡淡

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! W% J/ |/ ?+ W4 a# Q
) }6 R8 I! D% ^# [个人感觉问题出现在处理细胞---支架的方法上，不过支架的粘附性不错也是一方面原因。