请教高手：怎么才能做出好的ＥＢ呢？

刘森泉

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* p1 d: j; H: o
如果向造血分化的话，把ES接至低粘附性培养板上，第二天按步分化就可以了吗？需要在EB完全形成后转移至扩增培养基吗？低粘附性培养板要用Gelatin或Matrigel包被吗？谢谢！

刘森泉

回复 wwy551 的帖子; f: z2 [9 S1 z4 I0 I2 |4 r

4 g, }, u9 V# T. {谢谢！请问dispase可以用collagenase IV代替吗？ES部分分化了同样操作可以去除已分化的细胞吗？

刘森泉

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# B0 m1 |5 V5 p1 q3 G* F好的，谢谢你！

刘森泉

回复 wwy551 的帖子  w) g' ?) B& r5 u* N0 J
) w  h! q8 M7 `- Z# W
请教下，养的hES很容易分化，而且一些分化了导致传代之后就有很多分化的，恶性循环了。想用枪头在显微镜下一个一个挑，但是今天试了下，实在不行啊，这么多克隆，很难挑啊。有没有好一点的办法？谢谢。

刘森泉

回复 wwy551 的帖子4 m' L3 z' D$ o# p' z

9 C/ e3 E% y! w' Q6 A谢谢。我用的是CF-1的MEF，5代之前，ICR的也用过。bFGF用10ng/ml，perotech的，那接下去提高点浓度试试。

刘森泉

回复 wwy551 的帖子: G, n$ O- H2 M7 p) Y: C7 J' [
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你刮细胞使用移液管吗？还是1ml枪头？我昨天用枪头刮了ES和iPS，今天看了下，看不到克隆啊，都是散的细胞了，要么是分化的团块。最近养ES养的头疼，很多次请教你，麻烦了。

刘森泉

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分散酶消化后，用移液管在显微镜下一个个刮还是大范围地刮克隆呢，如果没有目标地随机刮的话是不是不用酶消化啦？

刘森泉

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7 ^& B$ i8 @* O4 G* }: T好消息。昨天根据你的建议，先用胶原酶消化十分钟左右，等到ES边缘卷起时就用移液管刮培养皿，全部刮下后移到5ml离心管里自然沉淀，几分钟后吸去上清，重悬后铺在MEF上，长得不错。我之前的克隆好多分化，希望这样的效果能好点，减少点分化。你觉得这中间还有什么需要改进的？谢谢！