慢病毒转染293T，荧光率还不到10%，求助啊

xxh83121

本人用包含IPS四种转录因子的慢病毒载体（三质粒系统）转染293T细胞，24h和48h后都没有多大变化，且荧光率不到10%，试了好几次都是这样。
$ K2 I* S: O8 E8 Q/ U5 R: C脂质体用的是罗氏HP，按说明书操作，另外质粒因为是中低拷贝，浓度不太高，这个会有影响吗？

birdflubirdflu

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& @' C- O+ A* G& C& x( i要考虑到转染操作的问题，有没有严格按照protocol做。另外，你的转录因子表达需不需要特别的别的质粒，如Tet-on系统。 ps：你的三质粒系统是invitrogen的？

igdb

回复 xxh83121 的帖子* j8 l* R3 y/ e

9 i0 p. P( p$ A5 E: z8 S这玩意就是不好做。。转染效率和细胞状态影响都很大。。我摸索了一个多月，转染成纤维最高也就能到30-40%左右。而且我发现质粒间的比例对效果影响不是很大。。

chentian820

要是293T都转染效率不高的话，肯定是你的转染系统出问题了。换一株293T试试，说不定你的包装细胞已经老化了。

牙牙丫丫123

首先确定一下你的质粒是不是有什么其他的污染，其次使用和你所用的293T配套的包装质粒，另外要注意质粒之间以及质粒和脂质体之间的配比度
6 H' D' O, X/ o4 }' Z4 Z3 ^

daviddow

估计是细胞的事，293一般转染都可以到100%的
: A/ T1 ]( ?, v

xxh83121

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1 {& Q1 I% t; P; k$ J* I! ]0 R; j9 E
是从公司买的现成的

xxh83121

回复 chentian820 的帖子( u# B8 l3 |- w' I/ I) i- t* a# @
6 I! F5 J+ g. i- s. H
细胞生长很快的，293T一般传多少代就老化了？

xxh83121

回复 牙牙丫丫123 的帖子2 }( X7 `% L& y- X

1 t! g) j: c1 ]! h8 |质粒提的时候浓度不高，还有杂蛋白，这个影响大吗？

nculsa747

首先确定病毒没有问题，转293T就行。其次注意保存条件。