人脂肪来源干细胞成脂诱导剂的酸碱度问题，高手请进~~

相宜

本人做成脂诱导，IBMX，胰岛素，地塞米松，吲哚美辛都是按照标准计量配的，胰岛素是用盐酸溶的，还有个试剂是用无水乙醇溶的，加入完全培养基之后直接做成脂诱导，细胞一直不贴壁生长，昨天下午取了其中配好的成脂诱导培养基测了个PH值，是1.98，我觉得是不是酸碱度除了什么问题，请各位高人指点迷津，如果是酸值高了，该怎么样调整呢？怎么样才能鉴定之成脂诱导剂的好坏呢？有无什么标准？请大家多提供一些配置诱导剂的详细步骤和经验~~

pailishi

怎么会这样？你用的基础培养基是什么？如果是红色的L-DMEM那是带了酚红的，可以做一个简单的指示剂啊

相宜

基础培养基是F12+FBS+两性霉素

meister

回复 相宜 的帖子! c' w" S& z: v) T% z
( [+ S: w& j4 U! [2 q/ m
肯定出问题了， 1.98 不会的，你什么东西加错了

Tim

* X. u$ x: D1 V7 W) _0 a$ {: C: R" m3 Q- n
回复 相宜 的帖子9 V" p+ ]0 a; ]4 u

) G3 B# B. {0 }$ S! q. o最好把你的配方说的详细点！以便于大家思考！1点多，肯定有问题

your1024

回复 相宜 的帖子& e. ]  a& t% N, A5 t5 Z

: P( P: u7 y* m+ o这个PH肯定是有问题的，会不会是你盐酸加多了？我记得胰岛素可以用PBS或者水溶解，用水可以完全溶解的，Hcl只是起到一个助溶的作用。好像配完了之后是偏碱性的，还要加酸调PH，如果没记错的话应该在6.8~7.2之间，错的话请指正。而且过滤完了还会有大约0.2的上浮。成脂诱导液的好坏，首先得看上去是那么回事，不能太怪异，有次同门配的相当恶心，一查是IBMX出了问题。具体的恐怕只能试验了吧，这个不太清楚，还得高手来回答。

秋星盏

和我曾经出现过的问题一模一样，我胰岛素也是用盐酸溶的，sigma的，但是发现也不容易溶解，还影响PH，PH明显偏小，要用NAOH滴定，调节PH至7.2-7.4之间。告诉你一个好办法，用医院里的胰岛素就行，50ml培养基加300单位，不影响PH。很方便的，你试试。

相宜

回复 your1024 的帖子
  O+ A: U' d" U: v& A  [
- v7 P/ R* M8 x4 D+ {' Y" s我的成脂诱导液是这样的：我打算先用20ML的完全培养基加入上述四种物质配成成脂诱导培养基，根据终浓度吲哚美辛 0.2mM(溶于无水乙醇),IBMX 0.5mM（溶于DMSO）,胰岛素10ug/ml（溶于PH=2的盐酸），地塞米松10-6mM（溶于无水乙醇），我考虑到20ml培养基的浓度配比，把各个溶质做了相应的单位换算。然后就得出来一个PH=1.98的结果。

相宜

回复 秋星盏 的帖子
3 E  q+ U. }( _
5 }( D) c9 g" m/ \% x  \3 V6 p我吧成脂诱导剂加进去之后，慢慢的发现有几个孔开始出现松针状小黑色物质，我怀疑是污染也发了图到论坛上，请大侠有时间看下那些图片，另外，我现在怀疑那些黑色松针状是胰岛素析出来的结晶，还请指点迷津。

相宜

回复 秋星盏 的帖子' j, w1 Q$ N0 ~3 c! S- J
( p- f, j% E- X/ H) c* B" ]
请教我们实验室买的有NAOH的粉末，改怎么融呢，用那种溶液融呢？需要过滤吗？滴定的时候有什么要注意的吗？