分子克隆：现在问题估计出在了连接上，因为空载体单切自连做转化不成功

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你的连接酶有没有问题？载体自连不成功的话，双酶切连接更难成功。
" I' S9 x; K" d8 oi建议连接做对照，实验组加lignase，对照组不加酶，其他条件一致，不转化，跑胶看看问题出在哪里。
3 |, s4 \! q! v如果是连接不成功，就是连接及之前的问题；若连接上就是感受态细胞太差。

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克隆的问题有很多可能性，想想问题所在，做做验证试验，不要只是换条件做重复。希望能帮上你一点。