请教鼠脐带间充质干细胞原代培养中遇到的问题

zjjwiner

最近在做鼠脐带间充质干细胞原代培养，用的是组织贴壁法，养了好久细胞一直没有养出来，实验过程中有些细节问题一直搞不懂，希望各位前辈支个招呀……4 l8 D- R+ j) C/ j! ~
1、母鼠剖腹产取出的脐带需要用含双抗的生理盐水漂洗吗？一些文献说是用PBS洗，但也有很多文献说用含双抗的生理盐水洗，大家是用哪个的？6 D6 ~: w' r3 R# g% P5 q4 b9 O. j
2、大家分离脐带沃顿组织一般用多久时间？感觉自己用的时间挺长的，所以脐带在分离之前用PBS泡着，分离好之后的组织也用PBS泡着以防干燥，这样做可以吗？
- `# L# E# G& W8 o6 A8 b+ E3、倒置贴壁的时间应该多久？有文献说是30分钟，有些说是2到3小时，差太远了吗？我这之前几次都是倒置30分钟，感觉组织贴壁得不好，上次就倒置了2个小时，大家都是倒置多久的？
" @4 E6 [0 \( M. ?4、倒置时间短，组织容易漂起来，倒置时间长，组织会干燥，细胞会脱水死掉，这个时间大家是怎么样掌握的？7 x! ~8 l+ s$ j. E# Y, H( i
5、从接种到见到细胞从组织块爬出大概需要多长时间？前几次养了一个星期都没见动静，就扔了……
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1 x( Y' p: h; D5 K, N大家救救我吧……感激涕零！！

zmm

回复 zjjwiner 的帖子4 _$ P0 v5 ?/ O0 Z6 }2 L" @) _

/ u- w3 {, ^  |- H4 R. n脐带间充质还是用消化的方法进行取材吧。这样效率会高。
" L3 D7 z  E% w0 G3 P" o要是导致培养的话，应该过夜，这样组织会贴壁比较牢，你正置培养家液是，不容易飘起啦。过夜不会导致组织干燥。

zjjwiner

zmm 发表于 2012-8-1 12:03
. d6 g& n4 [" T. y- K' m, `/ A" p0 ?回复 zjjwiner 的帖子
  C( p& a9 {8 H8 v2 y8 ?% _
* M: P# |. O  X) _0 ~) q) q脐带间充质还是用消化的方法进行取材吧。这样效率会高。

' J3 m- _2 _9 a; u' {, z就是说倒置2个小时还不够？上次倒置了两个小时那些组织块已经很干了，好像贴壁得还不错，都没浮起来……
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* s  B. n8 B0 j* |; V现在第三天了，一点反应都没有……愁死了，唉……

zmm

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. @* Y" t/ V' K: Z
1 q/ U) e0 o8 c$ }$ }; R0 ?贴壁法，是不容易爬出细胞来。大概需要七天左右时间。我一般贴壁过夜，再加液。

meixue1130

贴壁法细胞爬出来确实挺慢的，我们之前做的也是七八才开始看到有细胞爬出来，十天左右才能看到很多细胞，一般两个星期才传代。

小猪快跑

你可以两种方法都尝试吗，同时开展，闲着也是闹心。都说贴壁法慢，你也不要着急把细胞扔了啊！反正没染菌就放那养着呗！要有耐心了！

cjsbaicai

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1 l9 g* w5 F. [+ G' t7 P
7 O$ `; s4 M' p% {* \# C, a+ j我做的是人脐带干细胞的，贴壁的话一般的五天以上，用的是悬浮贴壁，干细胞是回游离出来自己贴壁的