大家帮我看看我用Matrigel包被的六孔板

若兰汀

最近在用无滋养层培养基养ips细胞，初次接触这种细胞，现在连板也没能包好，很头痛，具体操作如下
$ |+ M* c8 y5 Z' |9 u  ?- m我是将胶从-50取出，在四度解冻，在冰上以1:80的比例与DMEMF12混匀，然后包被六孔板，每孔包被1ml，37度40分钟。取出来，吸走多余胶液之前拍照就是这样，真不知道是怎么回事，爆了3次了，全是这样，很头痛啊。请高手指点一下，多谢了。

flydayzhu

没见着过，之前一直是这个稀释比例么？？我一般使用1:50或1:30稀释的。还有你稀释的培养基是4度拿出来的还是在RT的呢？

luckywen

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7 o/ F7 G6 ^" H3 i. P* Q没接触过这种细胞，但是不知道问题会不会出在培养板上，有的培养板是分悬浮细胞专用和贴壁细胞专用的。

若兰汀

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$ b3 e# K- w3 q6 D6 Z' ^3 P0 w+ K8 y是在四度冰箱里拿出来的

开心果王

matrigel首先在4度充分解冻，最好过夜。稀释的时候要迅速，说明书推荐说枪头预冷，实际操作起来到挺麻烦，因为预冷的枪头拿出冰箱后容易产生冷凝水，增加了污染的风险。我是在稀释时将枪头在预先准备好的F12中预冷一会，然后吸取matrigel后迅速混匀。楼主的这种情况也遇见过，摸索几次就有经验了！

flydayzhu

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7 N6 j7 e8 v' k. ^( l6 Y对了，忘了一点，一般Matrigel是10ml一瓶的，然后我们会先用1.5tube把它分装成500ul或1ml的放在-80，这个就按4度或冰上过夜解冻，然后用预冷的枪头分装。而后面用的话就把分装的管拿出来先在冰上化了，然后用枪吸一些冷的DF12加到tube管混一混吸出来加到冷的DF12，如此操作几次直到把Matrigel全部转到DF12，逐步稀释的Matrigel没有那么容易凝结在一起~~

flydayzhu

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; e5 {8 I; y/ {5 E4 y0 M对了，忘了一点，一般Matrigel是10ml一瓶的，然后我们会先用1.5tube把它分装成500ul或1ml的放在-80，这个就按4度或冰上过夜解冻，然后用预冷的枪头分装。而后面用的话就把分装的管拿出来先在冰上化了，然后用枪吸一些冷的DF12加到tube管混一混吸出来加到冷的DF12，如此操作几次直到把Matrigel全部转到DF12，逐步稀释的Matrigel没有那么容易凝结在一起~~

flywithiyiy

matrigel在温度稍高的情况下很容易凝固，因此与matrigel接触的物品都需要预冷，包括枪头、稀释液、需要铺被的皿等，操作的速度也要快。( x: l- J7 N  [3 h% Y% m$ M( [

希望之光

我也遇到过这样的情况，除此之外还能发现类似于污染的现象，都是那种只有在显微镜下才能观察到的絮絮，就是操作的问题，一定要严格按照操作说明书操作，还要格外注意无菌操作才能铺好呢，多试试吧
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pingzongyunlan

marigel我只用过一次，但是我是用无血清opti-MEM稀释的，LZ的结果应该跟这个关系不大，不知LZ的DMEMF12是否含有血清？确实是各种预冷，各种操作迅速~祝LZ好运~