细胞复苏后死亡细胞很多的原因？

小猪快跑

请教各位，为什么细胞复苏以后死亡细胞特别多啊？导致复苏细胞死亡的原因有哪些呢？

jennyshizz

细胞在冻存和复苏的过程中应该遵循慢冻快融的规则，这样能够保证细胞在复苏之后拥有比较好的活力，我们实验室之前一直在用无蛋白非程序冻存液，-80℃直接冻存一步到位，很方便，减少了细胞在冻存过程中受到的损伤，这样的话只要复苏过程中操作规范，一般情况下细胞的复苏率是可以达到90%的

huajie881026

8 x" ?( O& z' I( A9 e8 C' J& u! ~
& i, T8 e" F* q2 n) a回复 生旦净末丑 的帖子0 y) O6 g/ k$ s
; k' D5 @1 n) j1 e" S3 R" \; G
以前刚到实验室的时候他们教我-20℃放30min就行，放太久会形成冰晶，影响细胞复苏后的存活率。真的是不知道到底该怎样了？要不买个程序降温冻存盒？

生旦净末丑

细胞本身的状态，冻存体系，冻存时的操作手法，复苏时的操作等等都是影响细胞复苏率的关键因素，注意把握

生旦净末丑

回复 huajie881026 的帖子
( G+ @5 D( f+ k& _
# Q+ d$ q5 o0 r& B  g我们一般是-20℃要放置2个小时

huajie881026

我的细胞冻存后复苏效果也不好，很多死细胞，用的是6：3：1的冻存液（按Gibco说明书上做的），因为没有程序冻存盒，每次都是4℃ 30min，-20℃30min，-80℃过夜然后转至LN2。复苏出来大概死了有一半以上，困惑中！

vanessa

冻存前的细胞，应该尽量分散吹打开；冻存时冷冻处理尽量用程序性降温盒；复苏的时候，从液氮拿出细胞后立马放入37度水浴锅，待冻存细胞90%融化后立即拿出，利用余温把剩下的细胞解冻；解冻后的细胞立即进行后续操作。

文文2012

还有，你最好简单介绍下，你的冷冻细胞和冷冻过程，这样便于大家分析问题
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文文2012

这个影响因素很多，比如细胞种类，细胞适合的冷冻时期等都会造成

蒲公英

也有可能与细胞的耐受能力有关，不同种类的细胞的耐受能力不一样；- `; F: A4 L" g. z. Q
另外也与复苏后的接种方法有关，分为直接接种后过段时间再换液和离心后去除冻存液后再接种；' ^- f' g- J3 N9 X0 P- @) U
此外，也与冻存时的细胞密度有关~