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楼主: Dongqin11
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[请教] 细胞传代   [复制链接]

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发表于 2012-8-21 10:16 |只看该作者
回复 Dongqin11 的帖子/ t0 t8 i( T3 P4 h, P5 |
: }( `" J& ^* t0 |
用于人体治疗的细胞都不能用终止消化液的啊,这种情况下一般会选用细胞刮铲刮取吧。
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发表于 2012-8-21 10:10 |只看该作者
回复 Dongqin11 的帖子
- q- z3 J2 L0 g, X$ B- }, d. l, A/ S) z" ~$ r
用细胞刮铲刮取细胞啊。

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发表于 2012-8-21 09:55 |只看该作者
对于楼上的问题,要根据细胞种类灵活掌握
6 d2 {/ I6 b8 e6 o$ t- t+ k根据本人多年细胞培养经验,对于大多数细胞比如一些成纤维细胞的传代培养,胰蛋白酶消化后不离心,直接加入适量添加血清的完全培养液,混匀,分盘传代培养即可。但需要注意的是胰蛋白酶的添加量尽可能的少,一般以正好覆盖细胞,并能成功消化即可。
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发表于 2012-8-21 09:44 |只看该作者
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可以在消化即将结束的时候,将消化液吸弃,然后加入培养液终止消化,之后吹打均匀用于接种,基本可以避免残余消化的影响
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发表于 2012-8-21 09:40 |只看该作者
各有各的好处,这还是要看你的细胞类型以及生长状态,如果想更清楚的话就做一次对照,一个采用离心,一个直接加,看哪个方法细胞的细胞量多生长状态好,不就彻底明白了

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发表于 2012-8-21 07:46 |只看该作者
回复 myboluo 的帖子
, T  I  D" i% s0 R8 l9 o, y/ j8 h# b6 m5 q% P( a5 e: U
学习!

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发表于 2012-8-20 22:22 |只看该作者
这个要具体情况具体分析,大多常用细胞系或成系的肿瘤细胞系传代时可以不用去除消化液,有些细胞对消化液比较敏感,而低俗的离心反而影响不大,这时候就需要去除(大多见于原代组织分离的细胞)。而有些细胞恰恰相反,离心对其伤害更大,那就要尽量避免离心。
0 P. S9 ]" y& J# f自己的细胞要想养好(或者为了偷懒),最好前期多分几瓶,不同条件折磨折磨,摸索下细胞的脾气,比如多长时间换液合适,是否有密度依赖(传一瓶特别稀的看它能不能长起来)或接触抑制(细胞长满后不传代,只换液看细胞会不会大面积死亡)
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发表于 2012-8-20 21:41 |只看该作者
回复 Dongqin11 的帖子6 a' ~: @- @; y& }; J, ~8 R
0 a' A) O3 l% z1 [
你养的是什么细胞啊?可能细胞不同,消化传代的方法也不同吧!我养的肝癌细胞和iPS细胞传代都是进行离心或自然沉淀后吸弃上清的。
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发表于 2012-8-20 16:18 |只看该作者
回复 crystal_xjw 的帖子! ^: U' K# u+ Y7 ]3 X5 X* C$ C
6 D! f/ T1 q# @# u' V( B3 E0 `; L
哦,受教了~Thank you!

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发表于 2012-8-20 16:15 |只看该作者
影响倒不会很大,因为消化的过程是用胰蛋白酶,但是你的培养基里有FCS,所以FCS会有所损耗,但是对细胞不会构成威胁,只是培养基中的FCS减少了一些,适当多加一些培养基就可以了,或者多些FCS。8 s$ \9 y, C% b8 u4 y! ?1 L$ _8 O
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