成骨诱导的相关问题？

小猪快跑

1.MSC在做成骨诱导的时候据说细胞会出现聚集现象，并且有钙结节出现，请问钙结节是在胞质内还是胞质外还是内外都有，如果在胞质外，那么在初期或晚期形成的过程中给予换液的时候会不会把钙结节带走啊，还有如果拿液体清洗，比如PBS等液体会不会把钙结节洗掉呢？, H8 Q! ?4 ?7 r0 E( \0 B
2.如果诱导成功了，在染色的时候说是用0.1%茜素红Tris-HCL(PH 8.3) 溶液染色，那么Tris-HCL缓冲液配制的时候浓度到底是多少，浓度不同对结果有什么影响，怎么配制？溶质是Tris还是Tris-base?还有调PH 值有很多说法，到底PH在这个过程中的作用是什么呢？到底哪种好用呢？
8 l8 ^5 \( A1 J' F* P/ \请有经验的大师们赐予我力量吧！！

luoziwei

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2 u: \% ^0 h! |* q
咋样？染出来了没

clairezy1983

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' C' a, Y* c4 p) r$ l( g
+ J. H$ l" m1 i1 P茜素红染色哪一步会有杂质啊？没有啊，不用吧，我从来没有这么折腾过。如果有杂质的燃料，染之前过滤一下啊

小猪快跑

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- \8 M" ~/ J8 n8 r6 S' q: ?# r6 k- n3 V) Y2 s# F
麻烦问一下，染色以后清洗的时候可以用摇床清洗吗？因为有很多杂质，想好好洗的干净一点！

clairezy1983

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7 T) |1 J  T3 p/ Q' s3 u" {* G
5 b) s- w+ x: Z2 w# e$ F/ x没有染色的时候不是很好观察，可能显微镜之间还有差别。1 c& E0 C5 j# |; w( A3 S9 V
$ k1 H, Z, K9 N2 T! c. t/ p
我一开始以为一些黑色的地方时钙结节，但是结果证明不是。2 q. {* B8 ?( N" e  v# V9 ^! y: m% f

9 `/ F' F& P6 F  o# T9 x; r不过你看见的说不定也是呢，仔细看还是能看见一点。

小猪快跑

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! r5 p' d: _9 H3 [2 k) Y5 ^; j- C# [
( \+ j2 q% m+ m5 i3 o+ ~哦 好多个小结啊，谢谢了!
4 B  Z  J. Y' ~$ d, _1 g这些结节在没染色的时候也是能看见的吧，是不是黄色的啊？

clairezy1983

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3 l6 M$ Z5 N/ E! a  m( z9 v+ o
not sure, 可能可以吧，你试试

clairezy1983

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小猪快跑

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& `6 q( z3 m, B6 C0 F9 L
8 w3 M1 j* h1 m3 ^8 [7 [& `8 `您就是按这个配方走的吧，那肯定是染色成功了，可不可以传张照片晒晒啊，还有我的PH试纸只能测到8，可以吗？

clairezy1983

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, D  \+ |# i5 y; x% R5 |3 ^8 D4 r- v/ b% T
到成骨晚期的时候，由于细胞长得太满，可能会出现整层脱落卷起的现象。你说的聚集是指这个吗
3 u; K0 I0 X& M/ ?5 H: t钙结节在细胞外，换液的时候不会冲走的，因为肯定还有很多其他的细胞外基质，有一定的粘滞性。
0 ^5 c! j* J  Y& h工作液（PH 8.3 0.1%茜素红－Tris-HCL）的配制：
- j6 X; |1 L% t: _3 o" s. x1g Tris(1g左右均可)加入三蒸水100ml中，用滴管往配制液中加HCl（分析纯），一滴一滴加，边加边测PH，待PH为8.3左右即可，配好后加0.1g茜素红粉末，即为0.1%茜素红－Tris-HCL。% ?/ @6 ^/ I2 K+ j6 f( Q  i
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我就是用比色纸测试的PH值，差不多就行吧。