求助：间充质干细胞培养——细胞成团

caiyu07248

我养的间充质干细胞是脐带来源的，原代培养的前两三天细胞贴壁很正常，形态也挺好的，但是到第五时就不对劲了，细胞都聚集在一块，形成了一个个的细胞团，请大虾们给点意见！！, m- l- |# N2 T# s: ~$ J
从图片中可以看出，其实细胞生长得空间还有很多，培养瓶还有很多空白的地方，但是它为什么不往边上长，偏偏聚集成团呢？问题棘手，请指教！
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应该是血清的问题，我们这里到是还没出现过类似的情况，关注ing

esc123esc

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嗯，猜到你应该是用的无血清培养，对这种情况你要有针对性的用不同的酶来消化，消化不开主要的原因是细胞之间的连接，胞间紧密连接涉及到的蛋白之间的锚定和连接有很多种，在无血清条件下细胞由于失去外界给予的信号传递因子，必须要通过细胞与细胞之间直接的紧密连接来传递信号，以一种更为紧密的方式来保持自身的未分化特性，所以很难消化开，可以调整胰酶中EDTA和钙离子的浓度，也可以同时使用胶原酶或者其他类型的酶类，也可以尝试植物蛋白酶类比如木瓜和大豆消化酶类的消化试剂，这些invitrogen之类的公司有卖的，你可以咨询一下，有很多种类的，而且据说对细胞伤害比较小，have a try~

caiyu07248

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: s! r( c7 C+ o* w) q( |  ]我用的是无血清培养，问题是细胞成团了之后，不容易消化完全，再接种的话，会有一个个小的细胞团，然后培养又成团了。

esc123esc

具体解决办法就是，用优级胎牛血清，培养皿用胶原或者其他胶质包被以促进贴壁，但是我觉得没有这个必要，只要能维持好了间充质细胞的干，贴壁或者是成球悬浮都不重要，只是细胞的一种生活方式，看哪一种条件下你的细胞生长状态好而且不分化就用那一个条件，没有必要千篇一律

esc123esc

你用血清培养还是用血清替代物呢，无血清的培养条件下很容易聚团生长，无血清条件下没有血清那么多刺激生长的因子，细胞之间需要更紧密的连接才能维持干性，很容易聚团，如果是10%血清培养一般不容易出现这种情况

细胞海洋

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ditiger

细胞成团因为细胞在消化时没有被吹成单细胞悬液，在胰酶中加点EDTA试试

romanyuo

有可能是培养瓶或培养箱水平问题，铺匀后放到培养箱后要水平晃匀。

细胞-77

可能是干细胞的特性吧，