有谁从睾丸组织中分离过初级精母细胞吗？

随心

想从睾丸组织中分离出粗线期精母细胞，有谁知道具体步骤吗，睾丸必须是新鲜的吗？可以冷冻吗？可以的话在多少度冷冻？？？谢啦

490096812

回复 随心 的帖子
+ t  B; ?1 r& t* `% Z# H
1 h3 G+ c* X  x! A3 G7 d对啊，冻存的话很多东西就改变了，细胞状态也不好，所以还是建议你采来了不要冻存，我们冻存是为了验证冻存后还能用，实际很少用的。你在低温下12小时是没有问题的

ying

其实我觉得你要是能找个助手就好了。助手帮你取，你来计时并且做spread。反正曲精小管要泡在低渗液里面半小时的。

ying

回复 随心 的帖子
+ r1 ?; v9 o2 _- N' c2 F; x* o/ X8 Q6 e
你要是取了之后第二天做的话，我建议你先做一下预实验：
1 b: e( i* ~) \* ^将曲精小管大约1厘米（很少）泡在500ul DMEM-FBS-PS里，放在4度。然后你第二天来做spread。我估计是可以的，不会死太多。但不知会不会细胞状态变差使得实验结果不真实。0 _9 r1 ?9 V9 x9 {

& H4 w) L$ x8 `我曾经将消化成单细胞的睾丸mix细胞放4度过夜，第二天用PI染色，发现比起第一天的大约20%死亡，第二天大约有50%死亡。我估计如果是曲精小管的话死亡率会低一些，因为消化成单细胞本来就会损伤细胞。

随心

回复 490096812 的帖子5 Q3 n% ^$ ]* u4 g" Y* y4 d, y
; |1 m2 G# [- y; ?8 F0 [
就是这篇文章

随心

回复 ying 的帖子1 S; w4 T0 p& c6 x7 H

' y  X0 Y+ O6 _, @- s: o& @% U多谢，你的意见对我很有用，不过还有一个问题时，因为我的试验样品比如睾丸需要一天内都收完，没有时间每个样本都做spread，睾丸可以冻存吗，有方法吗。多谢多谢

ying

$ Y2 A! x' z* ?. S
' P5 h8 h' I$ g# C! l0 a. Z8 z7 Q回复 随心 的帖子
2 ]! |' X7 _# A& S9 }: j% q* g+ E: W+ S  h) L6 b5 ~7 h
混有其他细胞不可以做染色H2AX和Scp3染色吗？反正非四倍体期的细胞都是染色阴性，阴性得非常厉害一点背景都没有的。四倍体期里面粗线期的Scp3非常非常亮，而且H2AX是包裹着XYbody的极其显眼的一团，粗线期细胞绝对不会和细线偶线双线期混淆的。
0 k) \9 S7 u; N, k- h1 }我的经验是，曲精小管所有细胞一起做chromatin spread比较好做，要是分选成了纯的粗线期细胞，则需要至少10^6才能做出比较好看的图。10^5想做出来需要很有经验和技巧才行。你要是用FACS来分选的话很不容易分到10^6.用重力沉降的话肯定是不纯的，粗线期能有80%就不错了。
( S" o1 H& T3 h3 A! e! I0 ~# S另外，那个给文献的童鞋文献很不给力，根本没看清楼主要什么。

随心

回复 490096812 的帖子
8 o1 Q2 |" ?) r8 J9 A1 K! G0 ]8 O6 h$ A" z" X
你好，是这样的，我想做方面的东西，但是周围没人做过。所以只能多麻烦你了。
3 g$ S! t/ y$ Q  D2 `+ w) _3 @* C因为我的实验需要，当时采样时没办法直接做，如果不能冻存，现做我是没有时间的。所以就算麻烦我也要知道按照冻存的方法去做。请问你知道如何冻存吗？有文献吗或者操作步骤吗？: e3 J; j& |5 A$ j

, N2 N" u1 @9 `. _8 L- |# y再者我是想从睾丸组织中提取粗线期精母细胞，单独拿出这种细胞做涂片染色用。给您一篇文章，试验方法中有Preparation of meiotic spreads，但是他是新鲜组织的，不是冻存的。但是我也是要做SCP3和H2axa染色的。% T/ P$ s/ o9 `6 W

! M. |8 X+ x; W" t5 |3 O* F; d* Z5 _3 O' ]3 F# d2 _
所以帮帮忙啦，，你知道怎么冻存吗？

490096812

可以冻存，但是太麻烦了，我们是放在PBS中加双抗，储存，几个小时没有问题，放到一个保温箱，里面放上冰袋，

随心

回复 490096812 的帖子
( Z" o/ ~- ^! w& [% s
# o, ?4 L* M$ C取到新鲜的睾丸组织（注意保存）1 H2 ?0 d$ [6 {) t3 \  ~
如何保存？必须保证新鲜的组织马上开始做还是可以冻存呢？
  J/ I; O: j! H4 C) E- F谢谢