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[请教] RNA电泳,求解 [复制链接]

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楼主
发表于 2012-9-16 11:32 |显示全部帖子
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质粒模板要酶切线性化之后用蛋白酶K消化,酚抽,乙醇沉淀。转录时一定要加RNAse抑制剂RNAsin。全程要无RNAse。: l% ]; r; Z4 Z7 m
我觉得你这是转录时有污染。是不是没有加RNAsin啊?一般不会是跑胶的时候坏的。
+ F4 q+ ~2 y0 \  U我做的按你这一样的条件跑胶会是一条或两条带(两条带可能是非变性的情况下有二级结构),都是好的。
. n0 g& b1 \+ ~. B& a" I4 Y
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runsong + 2 + 5 谢谢
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沙发
发表于 2012-9-18 08:47 |显示全部帖子
回复 ying 的帖子9 ?4 n: x7 d& ^0 ^, T
$ Q. k2 {8 a% k& |: Y
我个人觉得像。MMkit里面有阳性对照质粒的,你可以按照上面的trouble shooting做一下嘛。带上pos.ctr( }) i; I7 L+ a5 D# c
我质粒线性化之后是要做PK消化和酚抽乙醇沉淀的。RNAsin只能干掉少量的RNAse,要是RNAse残留太多还是不行的。一般实验室RNAse主要来源就是小抽,你的枪最好洗一下。
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