求问干细胞诱导分化的问题

bty007

小鼠间充质干细胞成骨、成软骨诱导分化必须要加细胞因子吗？ 不加可不可以，细胞长势可能不太好么？ 8 {5 Y& L' v  n- j# G
请问BMSC方面有只促增殖抑制分化、或者只促分化抑制增殖的细胞因子么？

zb_ming

干细胞诱导分化当然要加细胞因子（也就是诱导因子）了，不然就不是诱导分化了，那是自然分化。其实所谓诱导到分化就是把维持干细胞生长的因子部分或者全部更换为要诱导细胞的生长因子（具体方法，不同干细胞和不同诱导方向略有不同，原理都一样的）即可。至于你说的促增殖抑制分化、或促分化抑制增殖的因子也是有的，可以查阅文献或者咨询相关人员可以找到的。有问题多多交流，祝楼主好运。

bty007

( r: j9 r& E. i& Z! z5 [
# l9 f' r! Q5 [: _3 m/ I: g& z
回复 zb_ming 的帖子- V/ q0 M0 R9 A4 }( V* L
- i+ h3 Z( |$ n' @9 Q% G0 D6 y( \" }
感谢回答~~我还想问不加因子的基础诱导不是就足够了吗？+ q# ^: c, j& P2 }0 G  s
比如在网上搜的间充质干细胞成骨诱导培养液成分如下：) B7 O0 A* G+ U" i/ y
成骨诱导培养基                              175ml
* F* k* O3 x0 s/ DFetal Bovine Serum(胎牛血清)                   20ml
5 |* C; q0 {. p6 N0 x' jPenicillin-Streptomycin(青链霉素)                2ml
3 U! Q% Z# b  D9 Y% u- zGlutamine(谷氨酰胺)                          2ml
/ a* ~: K" z8 y1 K4 g; E, a0 Z5 VAscorbate(抗坏血酸)                          400微升3 d- a6 x! Q( N4 a6 b% Q
Dexamethasone(地塞米松)                     20微升) \( B+ P2 ~+ q$ k3 K! b2 R
& u8 s6 |, y" J4 N7 N# l; |6 Z1 w
用上面的不能诱导吗？除了上面这些还要加些细胞因子吗？
/ x, n, ^+ z' J比如这句话说的对不对？6 y8 y& Y: ?' O  M- I$ c/ @* o
“将BMSCs培养于含有血清、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 、1,25-(OH)2维生素D3、BMP-2 等的DMEM培养液中诱导BMSCs向成骨细胞分化”

bty007

还有流式细胞仪检测细胞周期、MTT法绘制生长曲线之前需要加一些因子来抑制细胞分化促增殖培养一段时间吗？
. g# D' B& G4 n% x比如加到“含表皮细胞生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子(FGF) 的无血清DMEM培养液”对不对？
. b" O' W6 V! ~3 K8 |还是不加因子测周期更好一点呢？
; t8 H1 `. N; ^# A( `求指教，十分感谢

zb_ming

基础诱导就是我说的那个自然分化，是一码事。是否要加诱导因子，就要看楼主具体做什么了，也就是你诱导的目的是什么。干细胞诱导有几种情况，第一，就是自然分化，做个鉴定，算个分化比例。这个应该在早期大家都做过了。第二，就是施加各种影响因子，对干细胞进行干预，对比自然分化情况来观察诱导因子的作用。这方面应该也不是热门了。第三，就是有目的地施加一些因子，使干细胞向着自己预想的方向分化，通过对比来观察又到效果。这个目前做得比较多。第四，就是在前一步的基础上，再结合动物模型或者临床病理进行移植治疗，观察治疗效果。因为结合临床紧密，所以更有研究价值，是目前大家做干细胞的更高一层实验目的。

zb_ming

至于楼主说的做流式检测细胞周期、MTT法绘制生长曲线，一般做自然状态检测、观察细胞增殖情况就行。不过，这个也还是先要看楼主实验目的是什么了。比如楼主想要观察的不是自然状态（常规状态）下细胞的增殖情况，二是需要更好要求的干细胞增殖，那你必定要施加相关因子对细胞进行干预了，在此基础上，观察细胞的增殖情况对比自然情况下细胞增殖情况有何变化，是有有所提高，达到自己预想的目标要求等等。然后通过流式侧细胞周期、MTT法绘制生长曲线即可。祝好运。

biomater

回复 bty007 的帖子. L* n& c' X1 s0 u: W/ Y% Y" d8 H

. H5 `' g4 \3 E' G$ T# q, f地塞米松：通过促进Cbfal mRNA（核心结合因子-1）和Osterix mRNA （成骨分化必需转录因子）的表达而 和Osterix mRNA （成骨分化必需转录因子）的表达而促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化。
- Y# e& S1 T# N! V. c% RAscorbate：一种重要的营养素和氧化还原剂，在骨盐代谢及骨 Vc： 种重要的营养素和氧化还原剂，在骨盐代谢及骨形成中具有重要作用。在体外，它能增加钙盐的沉积，促进矿化结节的形成。! ^) m6 T8 {$ v3 M' |5 D& w
上面的培养基中的诱导成本主要是这两种！
: A) @3 X( P2 f8 z9 V" L5 u( T( @: ?4 ^+ M2 s5 K2 S
不晓得你要做什么!4 y) O' l; P; w2 e
做骨诱导后，诱导效率如何，诱导之后要换回完全培养液的，此时再测。。。
8 i0 G( M* L6 L' p( C做骨髓间质干的自然分化，直接测就好了。。。
, V7 u# ?/ K4 ?6 c0 r说说你的思路吧，我们现在都不知道你要什么？诱导or抑制分化？

bty007

回复 biomater 的帖子0 Z  a7 E( s8 ?. H% a1 q5 @

( N) Z% h2 \- q+ o& D4 O/ `8 K8 D感谢两位的回答~~
$ t9 X6 @* ?$ Y7 x, ~" y0 S, @6 R8 f( V: n( s
我是准备取间充质干细胞经药物作用后再做成骨、成软骨诱导，观察药物作用前后的诱导分化有何区别。
) a4 U, |+ N4 x# |. Z看了好多种诱导方法说的都不太一样，有点搞不清了，现在准备买现成的成骨诱导液，诱导液里应该不用再加其它因子了吧. X5 d* T2 V8 K/ [" i3 n

- }% p" R! O( ~, O在网上搜集了一些人用的方法，成骨方法准备用这个：' J, w( B0 `, v% N% F
（1）待干细胞达到80~90%融合时，消化。 （2）将干细胞接种于六孔板中，每孔约3x10 3个细胞，加入2ml / 孔干细胞完全培养液。放入37°C，5% CO2孵箱中培养。 （3）24h后，移去旧的培养液，加入2ml孔成骨诱导液。 （4）每三天换液，诱导2-3周。 （5）2-3周后，钙结节形成，进行茜素红染色4 k* C- U" p6 H

. l/ H% `! t) n2 k8 ?; A7 m成软骨诱导方法用这个：# X4 R( x2 ~) T+ f! e; B6 E0 y
选第三代生长良好的MSCs置于high-glucose DMEM中培养，当mMSCs贴壁生长到70~80%融合时，加入成软骨诱导剂，置于37℃ 5%CO2的孵箱内培养1~2周，每周换2次液，倒置显微镜下观察，14天后终止诱导。, f" ]; L( j" b/ g* ~0 l
( q# b5 B* |2 h. k/ p7 C
这两个步骤可行吧？

biomater

回复 bty007 的帖子4 j% C& [  K1 g5 T9 _  q7 ~  F2 O% c

# f/ m1 g/ T3 W2 O( Z9 P' U7 n! H现成的成骨诱导液,这个做为商品有说明书的。你可以按照他们的说明书来做的！和他们要份说明书先看看。。。。: A6 C: T* V- `& M5 X2 Z2 n3 h# L
诱导分化的培养液中的成分要搞清楚，可以问清楚诱导液中各个成分的作用。
$ ~8 W. @- v% Y6 {9 ^8 @0 \8 ^% n, w- L! B  g
8 w* S9 G5 H6 |/ a+ t
做成功之后，要上传两幅图片啊。。。# K+ p( ?" z9 }7 ~5 H
记得让我们欣赏下你的杰作。。。。
+ r( y2 q% ]4 R# u+ D4 U% d2 F
9 a! U7 S* n$ k. W, {6 q祝实验顺利

bty007

回复 biomater 的帖子6 W& U7 ]5 P8 u! l' Q4 x
9 f8 N0 b) m4 X% a- o: ]+ K
嗯，好的哈~$ B1 O, A$ l2 V/ t, K. ^6 d+ v9 x  X
做成功了一定发~不成功了也会来求指教的哈~# i8 N( k& v* \( r
感谢哈~~O(∩_∩)O~