请教培养菌时存在的活力问题

heiguzi1988

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4 A7 A, B4 i( K$ d7 [' \/ B首先，我较少做过比较细的微生物实验。现在遇到，请大虾解答帮忙。/ S! }/ x  x/ S0 h; Y
我要培养的一种菌是叫做k99的菌株（网上说这个放在minca培养基里最好）。操作流程是这样的：" S; R* o# R0 n
1，买来冻干粉，破碎之，即用液体培养基溶解，滴一些到装有液培的锥形瓶中，37度摇12-15小时。2，用接种棒沾点点菌液，划线在固体培养平板上，再培养12-15小时。（其他的菌液甘油保存-80)。3，用接种棒划一点点平板上的菌落，继而接种到斜面固体培养基里，培养12-15小时。将培养好的斜面保存在4度冰箱。' u5 Y( K+ r& g' ^
【以上是我准备工作，下面是正式用到菌的操作】; u! p* z& g3 _9 e
4，以后每次要用的时候，我就从斜面上碰一点点菌接种到平板上培养12-15小时。由于我最后要用到的是有活力且OD=1左右的菌液，因此用PBS冲洗平板上的部分菌落，将洗下来的菌落用PBS稀释至OD为1，即为工作菌液。8 m& p$ n! W6 |5 C! t
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上面是我的实验设计，不知道是否有什么需要改进的？如有，请告知（是不是我把这个菌固体、液体之间接二连三的转来转去，会造成菌的衰老？）。* u% u$ O  e! u+ v/ n( J

; J" @& U* s% \% q: y最后！！不知道怎么样才能提高菌液在显微镜下观察的活力？这一点很重要，但还是做不太好。感觉将那个PBS冲洗下来的菌液常温静置超过2小时后再观察，菌就基本上死了的样子，不会动了。（一个小时左右还有动的，不过动的也不是很活跃，我觉得可能是这个菌我培养的还不是很好造成的）4 f& o% o3 y+ O$ L( X
! c# r' M/ }4 f$ b" A
希望微生物的大虾们帮帮看看，不胜感激！

ambassador

菌的活力问题我觉得是不是还没有充分复壮的原因！培养时间和培养温度好好琢磨琢磨。