新手 请教

水平梦

  我想养骨髓间充质干细胞     怎么获取啊    有高手指教一下，我把小鼠的脊椎剪开，也不知道怎么能

sanna1

Read the paper:Nature Protocols 5, - 550 - 560 (2010)
4 E+ M! B3 x+ y; r+ QPublished online: 25 February 2010 | doi:10.1038/nprot.2009.238
. Y; G+ b1 F: [! a# t8 R% d/ x' b  Z9 y+ Q: Q  [
A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse compact bone/ k* U; S3 C0 v! E

! ~! Y% r7 Y+ yHeng Zhu1, Zi-Kuan Guo2, Xiao-Xia Jiang1, Hong Li1, Xiao-Yan Wang1, Hui-Yu Yao1, Yi Zhang1 & Ning Mao1# p! F" \, ]4 E! |# s- \
) p: w0 s7 h, ]! B8 S! Z* z4 Y
ABSTRACT
) V8 X4 `* R: P& |0 G: x
7 h0 D/ @9 {( R, T; E4 `Unlike humans, mouse bone marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs) cannot be easily harvested by adherence to plastic owing to the contamination of cultures by hematopoietic cells. The design of the protocol described here is based on the phenomenon that compact bones abound in MSCs and hematopoietic cells exist in the marrow cavities and the inner interfaces of the bones. The procedure includes flushing bone marrow out of the long bones, digesting the bone chips with collagenase type II, deprivation of the released cells and culturing the digested bone fragments, out of which fibroblast-like cells migrate and grow in the defined medium. The entire technique requires 5 d before the adherent cells are readily passaged. Further identification assays confirm that these cells are MSCs. We provide an easy and reproducible method to harvest mouse MSCs that does not require depletion of hematopoietic cells by sorting or immunomagnetic techniques.

wujh1986

从股骨  胫骨中取骨髓啊

水平梦

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' w) \% s8 c5 ?) x1 L8 W5 ^: z: t! ^, j' }  D0 t; ]1 d/ [
是那白色的东西  还是红色的啊  

wujh1986

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/ e) [4 m, c6 J; K
+ G# n" \/ t* ]7 m+ V+ d白色的啊,会带血的啊,所以后来用密度梯度离心去除红细胞啊

水平梦

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, B& C% Q" E% I' f
1 y; f* F7 ]# l$ k你能给我说一下具体的步骤吗？谢谢了

wujh1986

处死,酒精浸泡;剥离胫骨,股骨;冲洗出骨髓;过滤;Ficoll分离；收获单个核；接种；三四天后半量换液；一周左右全换

sysuhoo

按照楼上的方法，养大鼠的还行，但养小鼠的出来的MSC状态很差- J2 W, T5 A$ u
对于新手来说，为了保证MSC能出来，有个不精细的懒人办法，虽然细胞纯度只有80%多，但对于做一般的成骨成脂肪分化肯定是没有问题的
9 j7 O; Q1 S; X( ^方法很简单，省掉网筛过滤，省掉percoll分离，省掉裂红计数等等步骤。) t9 ~5 r1 B/ h3 r' E  ~
先要声明下，上述步骤在技术熟练以后可以逐步加入养细胞的过程当中，而且上述步骤过后，细胞的纯度能达到95%以上。
5 X, \5 F" s! k7 V. t. ?对新手而言，首先最基本的要求就是骨头在低温（冰上或冰袋上）无菌环境下一定要剥离完全，尽最大努力不要带软组织，不然会长出很多成纤维细胞，哪怕是剪掉骨骺端不要也要保证纯骨头。用1ml注射器吹出骨髓后，将骨髓吹匀后直接接种到平皿中（不要种到瓶里，不利于原代的消化吹打），一般一只小鼠的8跟骨头种一个75的大皿（对新手而言），全程半量换液，10d后即可看见融合，非常简单。
9 d# B6 y& A! |& R% S( f要注意的是开始养不好，很正常，多杀几次小鼠，多练练，就会好很多。另外分离骨头应在3% FBS的PBS中进行，全程低温，冲洗骨髓最好用20% fbs的培养液，国产和进口都没有关系。祝养小鼠MSC的新手都大大的进步！

水平梦

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" Y, Q& D$ E, v% t& {2 V' d2 _4 l' d& I  i
   受教了   谢谢昂

cuizhuzhu

我就是用的全骨髓贴壁法细胞很杂状态不好！