关于干细胞软骨诱导的疑问

86964109

请教高手：在干细胞进行软骨诱导的过程中，
1 I7 G) g1 h. ~+ H+ F2 K1.下述诱导液成分中哪些是必不可少的，哪些是可以省略的？他们都各起到什么作用呢？（成软骨诱导液：DMEM培养基中加胰岛素6．25 μg／ml、转铁蛋白6.25: A$ \7 `) k; B5 ~
μg／ml、亚硒酸6.25 μg／ml、亚油酸5.35 μg／ml、牛血清蛋白1．25 μg／ml、丙酮酸7 V( d  q7 ]4 ^1 ^% P! Y
盐1 mmol/L、抗坏血酸-2-磷酸盐37.5 μg／ml、地塞米松10-7 mol／L、TGF-β12 ~/ [- d, [% [% ]3 T1 w+ u( Z' m
10 ng／ml）。* I4 Z2 J. S' R% g% x
另外，如果只加入DMEM高糖， 50mg/ml维生素C，地塞米松10-7 mol／L，不加别的因子，有可能诱导成软骨细胞吗？  4 U4 \2 ]' l1 A. d
2.鉴定诱导是否成功阿利辛兰染色和甲苯胺蓝染色哪种比较好？: l; b( Z: \. R* r
3.一定要制成细胞团再诱导吗？
0 \) Q4 a" T9 s1 B
; p2 G, b2 o' u7 ^多谢指教啦！

xiaocell

来看答案的

sdyinong

先从简单的入手，第二个问题，ALcian blue 和Toludine blue染色文献报道都有人做过，Alcian blue 染色用的人更多一些，本人两种染色都做过，但从染色来说Toludine blue更容易染上，但是Alician BLUE染色最好做。
/ @" Y7 B$ n5 E6 W# g  h第三个问题 细胞必须要成团培养，这样才能保证细胞间接触增多，促使细胞向软骨分化。
' R0 e  O. K: U# N# e第一个问题，这个配方是常用的配方，是很多人摸索出来的，各种成分之间有相互联系和相互制约，如胰岛素和亚油酸，至于你所说的只加DMEM高糖， 50mg/ml维生素C，地塞米松10-7 mol／L，不加别的因子，很有可能发生的是成骨分化而非成软骨分化

86964109

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% O% i$ W# `/ W3 w! I+ {4 c9 o' L' Z
! \5 P# L; Q( ^8 @( q谢谢，这两天自己也查了一些文献，发现诱导成软骨可能必须的诱导成分包括TGF家族（主要是TGFβ1，3，BMP6可能也有一定效果），转铁蛋白，胰岛素，地塞米松（选用，可能通过调节SOX9来调节软骨分化）；而高密度培养是成软骨分化的最佳方式，单层培养易老化。不知道总结的是否正确？

sdyinong

楼主总结的很不错，在软骨诱导中TGFβ1和3是诱导效果比较好的，高密度培养时可以防止细胞老化，同时也会增加细胞间的信号传递，促进细胞外基质蛋白的表达；sox9是软骨早期重要转录因子，TGFβ信号通路可以促进其表达，转铁蛋白，胰岛素，地塞米松应该可以调节sox9，但具体是怎么调节SOX9蛋白的，我不太了解了

86964109

回复 sdyinong 的帖子0 g# ^- A. Z" K& e) a

( P" t' U4 m# I9 ^; V' N谢谢指教！  有问题再请教

如来的观音

86964109 发表于 2012-11-1 15:07
8 G, K3 o1 T1 p4 H+ D请教高手：在干细胞进行软骨诱导的过程中，$ W* w' \& P5 i
1.下述诱导液成分中哪些是必不可少的，哪些是可以省略的？他们 ...

. G8 N; @# I5 O" D* m
楼主上述中带有6.25ug/ml的，您确定是ug/ml？我看过的好像是6.25mg/ml。

86964109

回复 如来的观音 的帖子) O3 W. \# ~. n/ b3 H& B
; _# W0 t8 I5 V
我看见的是这样的，比如http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... t-%C8%ED%B9%C7.html
# N+ v: z: \2 [6 k4 f  N! k4 z6 h, V
你的是不是6.25 mg/L啊？

如来的观音

: c% @7 d6 l$ z! n/ m. h; S0 ]

86964109 发表于 2012-11-6 13:08 6 @4 ^1 b) Y! ^2 _# ?! K' m
回复 如来的观音 的帖子
* c- K% a8 ~: |4 v! @- |* o2 b, b4 G! G% j- l, g& {
我看见的是这样的，比如http://www.stemcell8.cn/forum-viewthread-tid-40430-hig ...

1 k- e5 O/ I7 D
4 t* A" J1 S+ t! U" F! r$ @也是在论坛里面看到的，具体哪个帖子不记得了，好像只有一点不一样的。过程如下：
* j; y; L  T' J, l. R5 C7 fCHONDROGENIC MEDIUM2 ^& P9 W2 ?5 g
• DMEM plain, high glucose, with L-glutamine
; j4 s( b- H4 K" t: X• 1%  Non essential amino-acids
5 {! m1 h( u, @* W+ p* d• 1%  Pen-Strep or Pen-Strep-Fungizone
. e& M! m( ?) C$ R; N• 6.25 µg/mL Insulin, Transferrin, Selenium (ITS + 1) (1 mL stock/100 mL media,ITS 是买的成品液体，配好的。买的是Cellgro 的10ml （可以稀释成1L的工作浓度）大约340元左右。（I /Insulin， T /transferrin, S / sodium Selenite )+1是表示一价的阳离子。)
- S9 r% l! s, [2 j• 100 nM  Dexamethasone (10 µL stock/100 mL media)地塞米松 sigma
$ c# ]% D9 \( E• 10 ng/mL TGF-β1 (1 mL stock/100 mL media)5 t) u/ ]7 T; a% P5 k

86964109

& g- \1 H% A4 m3 p- k* L  b) a% O! M* ~4 H* `
回复 如来的观音 的帖子: h% Y# I& _1 u2 b
" V8 e9 b3 n' y2 Y! x
哦 我们看到的是差不多的，micro；g/ml 是微克/ml，毫克是milligram