原核注射

小刺猬2932056

请问小鼠原核注射转基因阳性率高吗？一般生多少只能有一只阳性的，我最近做的生了几十只，经PCR鉴定，没有一只阳性的，很是郁闷呢，求教~~~~

天极拾贰星

阳性率跟质粒的纯净度 浓度 片段大小 注射量甚至是环状质粒或者是线性化的片段都有关系 只有给出具体的数据才能帮你

小刺猬2932056

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. S" z8 Q* U% S我的其中一个质粒是4200bP左右，回收后浓度是22，我十倍稀释的，是线性化的，注射用的是EPPENDORF的机子，这几天加大浓度，但堵针严重，注射后没有移植，观察胚胎发光情况，但都是一细胞或少数二细胞发光，囊胚没有发光，希望得到您的帮助 谢谢了

天极拾贰星

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我们一般的注射浓度都是3-5纳克左右  胶回收完了之后要过柱纯化 注射之前最好再离心一次 其实只要纯化好了就很难堵针了 不过有时候片段太大了也会堵针

小刺猬2932056

回复 天极拾贰星 的帖子1 F' |/ M0 M% R! f/ Y4 i7 ~

9 k7 V2 N, o* E& _! f我用进口试剂盒回收的，也要再重新过柱吗？

天极拾贰星

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质粒DNA的纯化跟你用什么回收的是两回事。。。。。