ES传代问题

fjnuxp

ES细胞在传代时，我曾采用Ⅳ型胶原酶消化5min后，用枪头将feeder层剥离，ES仍然紧紧贴在板子上。但是昨晚我在进行类似操作时（消化时间10min）发现，在剥离Feeder时，ES也被弄下来，并紧紧贴在feeder层上。需要说明的是这次我的feeder曾细胞融合度95%以上，比上次的要密，难道因为这个吗？还请高手指点，谢谢。

jennyshizz

请问养的是人还是鼠的ES呢？

wbj1983

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7 h. k) V$ T* H5 x9 U* j我不知道您说的是什么ES？如果人的ES，而且建系后比较稳定的话不用机械挑克隆胶原酶消化后轻轻吹打就可以。如果是小鼠ES用0.05%trypsin-EDTA就可以了！

dilal

胶原酶消化5min好像不够吧，胰酶消化都得2-3min，一般胰酶消化需要半个小时，建议延长消化时间。确定ES集落出现颗粒样细胞分离后终止。

BDFCM

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1mg/ml Collagenase IV消化5-10min，让后用玻璃移液管划下来，再轻吹几下就可以了。你后来MEF的密度高了，分泌的细胞外基质多了，自然就和ES贴的比较紧密，不好消化。