鼠ADSC传代问题

loveless

  请问各位，原代培养多久就可以传代了？说是长满80~90%，可是长得不均匀怎么判断能不能传代？有些地方长得很密集，有些地方长得很少甚至是空白的，这样能传代么？谢谢各位，还请不吝赐教~~~

小呵呵

分布不均匀，是因为细胞你没有摇匀。这样的话你只能是看绝大部分密度是80-90%，就可以传代了。

jiguojie87

不知道你是用的那种方法？是组织块法还是消化法？如果是组织块法不能等细胞长到80-90%，因为到达80-90%时组织块周围的细胞会出现叠层，细胞状态非常不好，你需要根据组织块周围细胞的生长情况进行传代。如果你用的是消化法，有两种可能：一、消化不彻底，没有过滤，培养上的时候还有组织块；二、培养的时候细胞悬液没有摇匀。

loveless

回复 jiguojie87 的帖子- m9 Z+ K" h+ k( R+ [6 ?& n5 z
* H' n% L8 x3 g0 Q* |# C. o
  两种方法我都有用，消化法可能真的是因为培养的时候没有摇匀所以才生长不均匀。可是摇一下能让细胞均匀么？组织块贴壁那个我观察了，有些组织块旁的细胞长得很多很密集，有些组织块旁边很少，也不密集，所以很难判断要不要传代。

loveless

回复 小呵呵 的帖子
  k2 z  z" k! u4 b
, G  `9 L, {) _/ t: Y  V/ A哦，我培养的时候都没摇匀，因为怕影响细胞贴壁状态，下次试一下。我觉得传代这个很难把握，因为细胞状态好的时候想传代，可是细胞数量少，等长得密集一点，有些细胞又开始老化了，所以很难判断。

your1024

如果实在难以判断，我觉得可以原瓶传一次代，不过这次要注意消化的时间，重悬的时候要注意吹打成单细胞悬液，因为长得很快，第二天应该就大致可以知道细胞量，然后就可以扩增了。

jiguojie87

回复 loveless 的帖子
% F1 x% P  A' w) o% q( e. M6 m* O, f
消化法：主要是吹打悬浮，一要轻柔，这样对细胞损伤小，二要均匀，保证细胞相对的分开。
) u/ A* D' b/ [3 E( |* H组织块法：不是所有组织块周围的细胞生长的都一样，这个我也不能说具体什么情况传代，根据实际情况，单层的状态好的细胞够传代用的就行。

meister

回复 loveless 的帖子* B" V! ]7 @, H9 U

$ _( O) ~+ ?. @% a% X; {长到80% 指的是最密集的地方。& }: _, ]1 j/ `* x/ B
如果总体细胞数量不多，可以原瓶传代，不扩大培养面积。

loveless

回复 meister 的帖子: C" E, f; n$ V4 A6 ?7 f; w
3 c, |; v- Y! D% s1 c/ M2 `& m
我原瓶传了一代，2d后发现贴壁的很少，悬浮着好多圆圆的细胞，不知道是死细胞还是活的没贴壁的······

loveless

回复 jiguojie87 的帖子
8 u% r( b# l: Q2 g# j$ L7 ?) o7 j1 J! u
我把消化法和组织块法长出来的细胞都传了一代，2d后细胞贴壁组织块那瓶比较多，消化法那瓶就很少，但是两瓶里面都悬浮着很多圆圆的细胞，不知道是死还是活的。（我估计应该是死了，不然也该贴壁了。可是为什么会有那么多悬浮着呢？）