想知道胶原酶和胰酶在-20度冰箱的保存时间........

弑之使徒

想知道胶原酶和胰酶在-20度冰箱分别的保存时间......... |6 \* t& U: E5 J
正在用一批2个月前冻的胶原酶和一批1个月前冻的胰酶来提取脐带间充质干细胞，但效果都不怎么好，离心下来的细胞层连以前三分之一都没，想知道到底是哪个先试剂失效的..........以后注意保质时间~

valentiboa

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8 J% X7 v4 h& t0 n胶原酶我们一般都是固体存放在4度冰箱的，胰酶一般是分装后放在-20度，可以保存半年没问题。我觉得应该不是保存时间的问题，第一，有可能是消化时间不够长，尤其是胶原酶，至少保证37度20分钟以上，胰酶的话，注意在消化前用无钙镁的PBS洗一下，如果还是不行，可以加入无钙镁pbs在37度培养箱中温育20-30分钟，然后在加入胰酶消化，细胞很快就可以detach下来的。

ying

胶原酶建议现配，过滤除菌。我的感觉是胶原酶在负二十放一段时间（如一周）就会产生沉淀（在显微镜下面可以清楚看见很多碎片状沉淀）。胰酶一般不会出问题的。

lql2006wh

胶原酶、胰酶的话，只要不反复冻融，-20℃放半年没一点问题。
) c, \+ c! H6 ?% L8 D8 D你分离脐带间充质干细胞，也可以直接剪碎后组培，分散铺板后，晾一会再加培养基养，也不错。7 O8 U) z0 z7 V" q# ]! H
用胶原酶消化的话，你可以参考下文献，0.05%。。。过夜或者0.1%。。。3-4h都还可以。
0 Z+ X  x- [0 B* v) C8 d5 O组培省事儿，省钱，不错。

lql2006wh

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. D, L* j5 Z: L1 E. H/ Y6 C- _( o1 R8 w% w* I& H; K
没遇见过沉淀现象，那你胶原酶融化后消化效果咋样？

valentiboa

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* E- ?5 G- G1 u. F: F. z
9 @( V! w$ t1 D& y; u; o胶原酶要固体保存，现用现配，过滤除菌。-20度溶解的胶原酶，如果反复冻融，确实会影响消化效果。