请教克隆的挑取

yaolinzhang

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3 c8 w4 J) v0 h% R. n不客气!其实你也可以在细胞间的相差显微镜下操作，保证无菌就行，另外，需要在培养基里加上抗生素，注意尽量不要接触到培养基。

your1024

回复 eley 的帖子
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多谢！想想就觉得好繁琐的操作。这种方法是在构建时会用到的吧？正常培养的时候也会这么做么？

your1024

回复 yaolinzhang 的帖子
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了解了，多谢！想让老板专门买个镜子，不愿意，唉

eley

回复 your1024 的帖子. o" P5 I8 f- k  p$ O3 }4 u5 z

2 `+ e! s- I' q+ H, v( `2 ^就是计算好细胞的数量，然后用培液稀释，分装到96孔板里面* t* B/ Y& ~& X
保证每个孔板的细胞数量是1个就可以了，+ P( e: c4 y, s7 i6 W% U/ g# V  s
等细胞长成菌落之后，用抗性去筛选，然后得到的单克隆就是比较好的阳性克隆了

yaolinzhang

回复 your1024 的帖子! S( c! P" u1 |3 ^9 c- }/ T

. \4 K6 g5 t# y3 ]0 n* ^小型的，在生物安全柜里面

your1024

回复 aulenuyah 的帖子
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请问是调哪个光源呢？我那个镜子底部光是透视的，完全看不到细胞轮廓，加了柔光板也没有作用。能详细说明一下么？谢谢！

your1024

回复 eley 的帖子1 s* w# V' q0 l6 x/ ^) V( x, k: [

& g" [* U! _% o4 [! T谢谢你的回答，我们实验室那个相差根本就搬不到安全柜里面去，看来还得想别的辙。能请教一下无限稀释是怎样的方法么？我不是从构建开始做的，有些方法了解的不是很清楚。

aulenuyah

我一个同门一般都是用体式显微镜的，调整一下光就可以了

eley

回复 your1024 的帖子
& Z, }9 ?* ?! B2 t8 e# r' E/ u
/ W3 K( a% y: {1 T相差显微镜就可以，我们实验室平常是放在细胞房的，可是要挑单克隆的话，我一般放到安全柜里面照一会紫外，然后在安全柜里面使用，这样有点麻烦，可是避免污染。7 H& _* X6 J2 J- A
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最近做了一次，觉得阳性率挺高的，所以就直接用无限稀释单克隆方法了，希望对你有帮助。

your1024

回复 yaolinzhang 的帖子8 [! `1 ]" A& \

! A/ e4 H) ~! w0 P& X6 h; m  g是那种小型的可以放进安全柜的相差，还是那种大型的，放在室内的？