如何把小块组织消化成单细胞？

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如何把剪碎的组织消化成单细胞，而且对细胞的损伤最小，用胰酶好还是胶原酶好？要多大浓度啊，跪求高手指点。

xld1984

一般原代组织块用胶原酶消化的较好，传代时一般用胰酶。  看看你分离细胞的部位，选择用消化法还是种植法

yehaizi

我们实验室就直接用的0.25%的胰酶，然后消化15分钟就可以了，这个消化时间还是得依照具体的组织以及剪得组织块儿的大小而定的

ccnuld

一般胰酶用的少，多用胶原酶，另外胶原酶可以联合其他的酶使用以得到最好的解离效果，比如透明质酸酶可以增加结缔组织细胞间基质的解离，离散酶可以促进成纤维细胞的解离。胶原酶IV工作浓度50~100U，时间不等，示组织类型而定。

漂泊的风

胶原酶好，胰酶作用力太强了，细胞容易消化过度，降低细胞的活力。

lizzy_81

什么组织啊，不同组织处理方法不一样。组织可以组织块贴壁，剪碎，胶原酶消化，还有用组织处理器的。

hbs08230

如果是各大脏器的话，可以考虑用留置针做perfusion。 先灌注Heparin，然后缓冲液，然后0.025%（w/v)collagenase typeIV/II， 然后缓冲液。摘下脏器放在culture dish里用1ml的枪头撕开，就能看到分来的细胞流出。

Robert-A

不同组织来源的细胞应用的目的决定你的方法学

静夜的单簧管

原代主要分为两种方法，一种是组织块培养法，一种是消化培养法，我认为后者消化的效率更高，此外用我个人认为用胶原酶进行消化培养效果更好，同时还应该根据不同的组织学类型选择合适的胶原酶类型（分I、II、III、IV型）。& M6 ^. I9 H, \0 Q. r; l( Z( R
如果肿瘤组织原代提取因为组织较疏松，可消化时间短一些，而一些较致密组织的原代培养则需消化时间更长，此外要原代培养要消化效率高关键还在于要将组织剪碎，越碎越好。抗生素的应用也很重要。

nydfy

组织消化一般都用胶原酶，如果变粘稠可以加入DNA酶1，不同的胶原酶针对不同来源的组织，你可以查一下，如gibco and roche!