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猪脂肪干细胞的分离培养及诱导分化 很多问题都不懂
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作者:
倔强的投手
时间:
2012-12-17 22:14
标题:
猪脂肪干细胞的分离培养及诱导分化 很多问题都不懂
本帖最后由 细胞海洋 于 2012-12-18 10:30 编辑
4 x$ ^2 Z& H: Y4 M4 |. ~# Q/ q
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我最近在做猪脂肪干细胞的分离培养及诱导分化，由于是第一次做，很多问题都不懂：
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4 u0 b' J! m$ Q+ |& E- m+ k7 D
1 猪脂肪干细胞一般传几代之后就不能分化了？之前听师姐说，牛的传3代就不能再分化了。由于我没有对锁获得的细胞进行鉴定，其中可能肯定含有一部分的前脂肪细胞或者其他细胞。请问这种情况下，我一般可以用第几代的细胞进行诱导分化？
7 X9 u' y) E3 ~) h9 i
2 A6 y6 \6 ?3 M. q0 _
2 猪脂肪干细胞的接种密度一般是多少？我之前接种的密度是25000cells/cm2
+ G. o% D; q8 S
' U) v: W" g6 [* [1 ]5 O6 ^ e6 r$ C
3 我用的诱导分化液是无血清的，还含有胰岛素、DEX、IBMX和Rosiglitazone，请问这种分化培养基可以吗？我看好多文献上面都是加血清的
7 T d) F8 ^& X& P3 V' a2 c" I6 V
9 P& N" L( J0 n% o" H
4 在诱导分化后第三天开始，我的细胞有好多都漂起来了，我用的是第三代的细胞，而且剩下的细胞液没有看见明显的脂滴，请问这是怎么回事？
5 K5 ~; U# g8 m% M6 \9 E) ~
3 O# Q. z& K/ E
这是我分离得到的细胞
8 C# E5 n2 e& Q6 w3 {9 V# O' }5 s: X g8 x
[attach]48297[/attach]
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这是加诱导分化液之后1d的照片
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* K" f, N, [2 S% `: S: Q
这是诱导分化第2d的照片
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1 v# m( g6 p8 c+ u3 o9 z% a
这是第3天的，很多细胞开始飘起来了
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作者:
liyujuanmarry
时间:
2012-12-18 10:54
1、你养的细胞状态不怎么好
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2、可以看到你做过诱导分化后的细胞大都死了，所以会飘起来
$ X0 @ |8 A$ ]) }- ?$ E0 z4 G3 Z: D% ^
3、可以考虑更改一下培养基配方
作者:
倔强的投手
时间:
2012-12-18 11:13
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liyujuanmarry
的帖子
( Y3 f6 p2 ~6 [$ z* o6 f
# X9 X X- J! z1 X5 |! K. ]6 J% `
1 其实加诱导分化液之前还是挺好的，很快就长满了，两天之后就差不多100%融合了。是不是在80-90%左右融合的时候就可以诱导分化了？
- ?$ B; I5 E7 D7 Y% S6 I
% R9 ]2 k! Z: `) J0 O4 y7 I
2 是的，我也认为很多细胞在诱导分化的过程中死亡了很多，应该怎解决这个问题呢？
1 W' q& x2 s3 d! G2 N9 Y
5 q$ m+ X4 c' R
3 你说的是更改诱导分化培养基的配方？是不是加10%的FBS会比较好？
作者:
liyujuanmarry
时间:
2012-12-18 12:28
一般情况下细胞长到100%融合的时候再处理已经晚了，细胞就很老了，可以在80-90%融合就处理。其实从你发的的第一张细胞图片就可以看出，你养的细胞状态很不好，正常情况下的脂肪干细胞应该是长梭形的，或许你在诱导之前的细胞培养液就不是很理想。
作者:
sunflower636
时间:
2012-12-18 21:47
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liyujuanmarry
的帖子
% z( ~ c! R5 N0 d. r& J# f8 q3 G
# d- D+ R1 P4 {2 b0 C$ B
猪和人的脂肪细胞有点不一样，我都养过。猪的脂肪细胞贴壁后出来就是这个样子，不是人的那种细长的梭形，我认为这不是细胞老化。
作者:
sunflower636
时间:
2012-12-18 21:48
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倔强的投手
的帖子
, O! \' Q9 U7 G" R0 x, U
# a% t; x$ ?0 Y* m, ~/ G" k0 \
应该是没有血清的缘故，可以把血清浓度控制得低点。2%到5%，试试。
作者:
倔强的投手
时间:
2012-12-18 22:30
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liyujuanmarry
的帖子
) Q+ Q; d" y+ b( p
; p$ e) K, W1 z2 H" W p1 I
那张不是诱导前的细胞，就是细胞生长过程中我拍的
1 E! y; @! I5 K; l$ I
下面这张是诱导前拍的照片
5 d( d( Y6 ?0 x( C6 a) [
[attach]48314[/attach]
作者:
倔强的投手
时间:
2012-12-18 22:33
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sunflower636
的帖子
6 `% e' z% H7 g! o) e
8 S; j. d. j5 K: o8 f% b* z# C
我用的是第三代的细胞，不知道是不是有点老了，因为原代培养，本来就传不了很多代。
( x& V6 g5 N6 L& U: h
1 R6 N9 A2 P8 T4 v
我也感觉可能是没有血清的缘故，本来诱导分化对洗吧就有一定的毒害作用，再加上无血清培养基中的应用成分可能也相对较少，所以才造成了细胞的大量死亡
作者:
深海鱼
时间:
2012-12-28 22:43
为什么不加血清呢？三联诱导都是在10%血清里加的。话说你诱导人家成脂又不给营养，所以只能死给你看了
作者:
倔强的投手
时间:
2013-1-2 01:45
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深海鱼
的帖子
' M6 I% ~' D1 V1 I5 b7 C/ M
& j, X: o6 V J6 R7 s% X
好吧，下次加FBS试试
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