请问大家都是分离哪个时期哪个部位的神经干细胞呢？

碧落

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- Y) P! w+ r# z; |* h; D/ S我们实验室老师现在要求我们取小鼠E12.5的大脑皮层来源的NSC。
9 I& S& Z4 ^2 f& z7 T但是个人觉得难度好大，我们自己繁育，人工合笼，精确计算天数的ICR小鼠和C57小鼠。
2 c+ F0 q) d4 o+ W* ~% v* [12.5天的胎鼠还很小很小，大脑发育还不是很完整，感觉整体都是膜结构，水分很多。分离的时候，不容易撕脑膜，特别容易破坏脑结构。E14.5的好一些分辨，但是分离后免疫染色鉴定又存在大量神经元。
5 V3 f) @0 C, V$ b8 s2 [请问大家是怎么做的呢？采用大鼠还是小鼠？分离的是哪一部分，分离效果如何？
/ z- Q" S# {1 E期待大家的交流和经验~
3 f+ Z2 Q1 g4 {4 A9 ]7 E另，祝大家新年快乐，实验顺顺！

碧落

咋木人回复呢，自己顶一下

小渝

皮层的话小鼠一般是E12.5d左右，大鼠一般是E14.5d左右，如果有解剖显微镜就会相对容易些，我取的大鼠，感觉还好。不过最关键的是看你实验的需要还有就是文献的支持。个人愚见！

碧落

回复 小渝 的帖子- P8 \- O# w2 X' J
$ d% H9 j, D0 [* M0 z6 d8 ]( P" V" K
恩呢，O(∩_∩)O谢谢回复

rhmm

我做的是孕14天左右的小鼠大脑皮层，脑膜一开始确实不好剥，一开始总是把组织弄得乱七八糟，无法剥离出完整的大脑皮层。不过做过几次之后，还是蛮好弄得。关键是要掌握技巧。你要右手拿带弯的尖头镊子从底側剥离，左手拿普通眼科捏稍稍固定。
- W7 g' T3 S+ G6 H$ `; B一定要使用解剖显微镜，脑膜剥不干净养不出好细胞。杂质会很多，干细胞球形状也不规则。
- U- d3 [( u0 S/ s还有就是老兄，我真是不明白，神经干细胞鉴定也是用nestin和Brdu啊。分化鉴定才鉴定神经元和交质细胞吧，而且如果你做的是分化鉴定，不可能只有神经元，很可能是你的胶质细胞鉴定抗体或者其他试剂或步骤不对头。好好看看文献吧，蛮干只会浪费时间和精力，做好充足的准备再开始实验吧，俗话说“磨刀不误砍柴工”忠言逆耳啊

湖南干细胞

+ B) Z  y1 R8 _$ n# _: y9 K
2 ~, u2 I5 u5 S6 n1 C6 o- y回复 碧落 的帖子
6 y; `/ H7 Q7 p* J7 B8 X! x
# w2 @/ x( d% \! G我们实验室有用海马回的，也有用大脑皮层的。以前养的是皮层神经干，没有专门把皮层取出来，只是取了带皮层的脑组织剥膜。现在在用新生鼠海马回提取，发现海马回易碎，不容易分离出来。分离出来后剥膜剥不好，就不容易吹散。我现在打算用眼科镊和剥离子分离试试。

rhmm

个人觉得可以试试，所谓的不容易分离很大程度是因为不熟悉，没掌握技巧，多操作几次就好，熟能生巧嘛。只要保持认真谨慎，反复失败，反复试验的精神，会做好的

碧落

回复 rhmm 的帖子' y+ z- t* m* h! Z- i3 T5 z

5 j" @7 F- Z: e; F  N8 l7 n额，谢谢你的忠言逆耳。可能我没表达清楚，我说的鉴定是指染nestin，tuj1,GFAP，从中看干细胞的比例。