干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 请问大家都是分离哪个时期哪个部位的神经干细胞呢？ [打印本页]

作者: 碧落 时间: 2013-1-2 22:28 标题: 请问大家都是分离哪个时期哪个部位的神经干细胞呢？

本帖最后由碧落于 2013-1-2 22:28 编辑

我们实验室老师现在要求我们取小鼠E12.5的大脑皮层来源的NSC。
但是个人觉得难度好大，我们自己繁育，人工合笼，精确计算天数的ICR小鼠和C57小鼠。! @5 {' R* D4 O
12.5天的胎鼠还很小很小，大脑发育还不是很完整，感觉整体都是膜结构，水分很多。分离的时候，不容易撕脑膜，特别容易破坏脑结构。E14.5的好一些分辨，但是分离后免疫染色鉴定又存在大量神经元。1 i2 o- a% @( v' O
请问大家是怎么做的呢？采用大鼠还是小鼠？分离的是哪一部分，分离效果如何？. k( [/ f% k1 Y$ C8 ?7 ~6 x: n
期待大家的交流和经验~5 C# P4 k7 L+ q! d3 \" }
另，祝大家新年快乐，实验顺顺！

作者: 碧落 时间: 2013-1-8 14:50

咋木人回复呢，自己顶一下

作者: 小渝 时间: 2013-1-10 21:12

皮层的话小鼠一般是E12.5d左右，大鼠一般是E14.5d左右，如果有解剖显微镜就会相对容易些，我取的大鼠，感觉还好。不过最关键的是看你实验的需要还有就是文献的支持。个人愚见！

作者: 碧落 时间: 2013-2-19 21:10

回复小渝的帖子: j: `* W* H( ?1 o$ v/ L
( z% ^5 `" T# Q }
恩呢，O(∩_∩)O谢谢回复

作者: rhmm 时间: 2013-2-21 19:00

我做的是孕14天左右的小鼠大脑皮层，脑膜一开始确实不好剥，一开始总是把组织弄得乱七八糟，无法剥离出完整的大脑皮层。不过做过几次之后，还是蛮好弄得。关键是要掌握技巧。你要右手拿带弯的尖头镊子从底側剥离，左手拿普通眼科捏稍稍固定。9 `7 y7 V E! H9 t1 _4 b
一定要使用解剖显微镜，脑膜剥不干净养不出好细胞。杂质会很多，干细胞球形状也不规则。
还有就是老兄，我真是不明白，神经干细胞鉴定也是用nestin和Brdu啊。分化鉴定才鉴定神经元和交质细胞吧，而且如果你做的是分化鉴定，不可能只有神经元，很可能是你的胶质细胞鉴定抗体或者其他试剂或步骤不对头。好好看看文献吧，蛮干只会浪费时间和精力，做好充足的准备再开始实验吧，俗话说“磨刀不误砍柴工”忠言逆耳啊

作者: 湖南干细胞 时间: 2013-2-22 08:27

本帖最后由湖南干细胞于 2013-2-22 08:44 编辑 + W: f2 V: T2 m) c* E3 q6 k6 P0 y. E
( `- ^) m5 w1 R% {1 A" L
回复碧落的帖子

我们实验室有用海马回的，也有用大脑皮层的。以前养的是皮层神经干，没有专门把皮层取出来，只是取了带皮层的脑组织剥膜。现在在用新生鼠海马回提取，发现海马回易碎，不容易分离出来。分离出来后剥膜剥不好，就不容易吹散。我现在打算用眼科镊和剥离子分离试试。

作者: rhmm 时间: 2013-2-23 10:51

个人觉得可以试试，所谓的不容易分离很大程度是因为不熟悉，没掌握技巧，多操作几次就好，熟能生巧嘛。只要保持认真谨慎，反复失败，反复试验的精神，会做好的

作者: 碧落 时间: 2013-5-21 11:15

回复 rhmm 的帖子
; h0 N. R5 K, v& u
额，谢谢你的忠言逆耳。可能我没表达清楚，我说的鉴定是指染nestin，tuj1,GFAP，从中看干细胞的比例。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)