关于神经干细胞的培养 请教

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大家培养神经干细胞用的是商品化的完全培养基还是自己配的比较多呢，一般培养一瓶细胞需要取几只孕鼠？以下是查了一些资料后设计的实验步骤，请大家帮忙看看可行吗，有什么格外需要注意的细节吗？/ o; ]1 i2 S7 I( q# v. J( X, o5 V) H
(1)取孕14.5天SD 大鼠 ,引颈脱臼。在无菌状态下剪开腹部皮肤及肌肉，取出胚胎置入D-hank’s液中。' O: [- m+ m. |8 n/ u; X
(2)逐个仔细分离出脑组织置入D-hank’s液中漂洗，剥离脑膜及血管,分离出海马,剪碎成约0.2mm×0.2mm大小的碎片。
( c9 c$ W8 g- y(3)加无血清的神经干细胞培养基 [组分为DMEM/ F12 (1∶1) 、N2(10％) 、20 ng/ ml bFGF、20 ng/ ml EGF 、1%双抗]，以Pasteur管轻柔吹打成单细胞悬液,再加少许细胞培养基于离心管，以获取更多细胞。$ z5 P! _/ g5 p7 @8 e& ?
(4)台盼兰染色后计数，以1 ×106/ ml 的活细胞密度接种于培养瓶中。 37 ℃、5 % CO2 孵育,倒置相差显微镜观察。$ ~1 f  }$ L5 e: q3 g. q1 {# D+ J
(5)细胞每5－7天传代一次，收集神经球，以神经干细胞培养基重新制成单细胞及小细胞团悬液，以1 ×106/ ml 的活细胞密度传代。
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/ ]# @9 S1 k7 {# M" k6 |PS：还有神经干细胞的培养一定要经过自新能力鉴定、nestin 表达的鉴定和多向分化能力的鉴定吗？
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8 Z! H1 E- Z8 G! I& Y谢谢啦

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5 j7 J: W% {& Y7 l+ I( Q回复 湖南干细胞 的帖子
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谢谢分享  不加双抗，那你们的培养环境和无菌操作一定很好

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回复 湖南干细胞 的帖子" t# V3 e% I4 Q5 d+ ?6 E5 K
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谢谢，学习了，先看看能否分出来吧 有问题再请教

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回复 小渝 的帖子! o7 y$ Y* B6 Z; S% Q+ [
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谢谢指教，那么如果从全脑组织分离培养干细胞不可以吗，传代过程中不能纯化吗？有人用注射器推打分离细胞，请问可行吗？

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回复 小渝 的帖子
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5 E$ e0 M; T  E: q1 V抱歉 才看到帖子，具体文献我一时也找不到了，是提神经干细胞还是神经元的也忘了，就是记得在丁香园还是哪里看到有人提到过，在英文文献里好像也见过，还提过什么规格的注射器