DNA纯化的原理？

asiar

DNA纯化的原理是什么？纯化对产物有影响么？有的说会造成DNA 模板的丢失, 尤其对于低拷贝模板？

levell

基本是利用DNA易溶于水，而不溶于有机溶剂的原理，方法有酚氯仿抽提、离心柱、磁珠，不知道你要用哪种啊。DNA模板丢失有可能是由于DNA降解造成的，操作上注意采用新鲜组织，尽快操作，在裂解后注意轻柔操作，实验用耗材要注意高压灭菌，避免DNA酶的污染。

goast8

楼主是组织提取还是细菌培养物中的质粒提取？: \8 r/ B! [9 u: h8 }
目前质粒提取应该主流仍是碱裂解+过小型离心柱纯化吧，对于低拷贝质粒，可酌情增加初始培养液的体积

chentian820

实际上任何纯化步骤都会造成样本的损失。如果想减少损失，可以适当增加DNA的沉淀时间，同时可以在低温助沉。如果是用试剂盒抽取DNA的话，就可以用碱性水溶液、增加洗脱体积及溶解时间等方法提高得率。如果想提高浓度，适当减少洗脱体积。

asiar

回复 chentian820 的帖子- \& B/ D1 }2 s
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我用的Promega 的Wizard®SV Gel and PCR Clean-Up System柱纯化试剂盒，样本为10kb的扩增DNA，纯化之后的量只有纯化前的1/4~1/3,是不是没洗下来？

ali97

DNA 溶解时一定要注意PH值， 以为这个会严重影响DNA的是否降解。 我提取的DNA 整整在零下-20保存了1年后用的， 效果还是那么好。 所以说保存DNA要注意溶解液的PH值哦。

weiyepan

回复 asiar 的帖子. ]/ p4 f2 G( z+ W, c, a

( h7 L9 V3 \# J2 c8 v" G5 W# R大片段一般的问题是没洗下来。最好用pH8.5左右的buff洗，另外可以70度加热个5分钟再离心。

damaoshu

TE buffer 就很好用.先把TE提前加热到60度,然后再加到纯化柱子里.大概2 分钟后再离心.可以再加一次.

lousia04306

原理是基因组DNA的纯化一般是通过裂解液处理样品，裂解细胞，将DNA从细胞核中释放出来，并使gDNA与蛋白质分开，DNA仍留在上清液中，通过后续的异丙醇沉淀将DNA沉淀分离出来。