包病毒细胞总是污染，怎么办？

yueweilei

最近，包病毒的时候，总是在转染完，换液24h，发现细胞被细菌污染了。不知道怎么回事啊？同时做的别的转染实验的细胞都没问题！是不是包病毒的质粒都得去内毒素啊？求指教！

huangcong1988

回复 yylhxylong 的帖子2 l# w$ h9 ?: q5 b# i9 H& F2 p

, H" A8 [; m4 P, G转染的整个过程都不能加！转染的那六个小时，转染后直至收毒都不能加

monk125

检验是不是质粒污染很简单 搞点质粒在神马都没有的新培液过夜后你再去看看 假如不是质粒的问题 我觉得你应该check下病毒吧 实在不行加点双抗 很多实验培液里不加双抗细胞都养不活 哎 这真是伤不起啊

牙牙丫丫123

回复 yueweilei 的帖子# m0 f3 [0 X+ S) L; K9 q0 L" x/ f

; M/ W7 E4 t- }( e# u; u6 F9 j9 z第一：你包装病毒时转染那一步用的基础培养液和其他细胞是不是一样，比如说包装病毒用Opti-MEM，其他细胞用MEM；第二，你用的脂质体是否是一致的。如果上面两个都是一样的，一般是质粒污染了。而且包装病毒过程中最好不要加任何抗生素，会影响病毒滴度的。

yylhxylong

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, }0 B- t" N4 i- r9 g/ T* _: O# n$ R" U* M; t
你说的medium 说的是转染的六个小时里，还是转染后的换液~~+ ?; f1 A  c- j6 m/ q
lipo2000转染的六个小时里面我们也不用双抗~

huangcong1988

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5 b  Y9 x0 m6 r+ I( e0 }: ^; oyuhaoze说得对的，转染的时候medium里面是不能加双抗的，转染试剂里面也有说明，而且他这个包毒过程老是有细菌污染，我觉得很有可能是操作的原因，包毒过程一般很少能有污染的

huangcong1988

回复 yylhxylong 的帖子# j6 S1 _# {( S; K. h. H8 x
6 E1 p/ m5 i1 m' v' m' s
转染的话，medium 里面能有双抗么？lip2000转染的话，培养基是不能加双抗的

yuhaoze

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! v7 |! _7 y4 ], K5 m
% F8 h4 T& n0 k! c1 y呵呵，从源头上解决污染的问题，不要靠加抗生素来安慰自己。就算是加了抗生素一时抑制住了细菌真菌了，包装效率上不去，不是一样实验不成功？那这主要矛盾又是什么呢？

ying

回复 yuhaoze 的帖子2 ^9 f* \: n& J4 y1 E

- I% u4 _% g1 ?) z他的主要矛盾是污染，而不是效率低。

yuhaoze

转染时候不要加抗生素，会影响效率。包装病毒的时候更不要加