基因表达载体构建的引物设计问题

zhangtcm

基因表达载体构建的引物设计  K. g& f9 Q4 M7 _
为什么如果目的蛋白融合在N端，编码区第一个密码子必须为atg，3’端不应有终止子?
6 P/ d4 b2 c& }/ Z为什么目的蛋白融合在C端，可以不考虑起始密码，但3’端必须加终止密码?: a) I* C2 v7 P9 }( I: |0 [

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bio-bin

同求高手指教！是否目的蛋白融合在N端，3’端有终止子，就终止了目的蛋白的表达，即达不到融合目的？
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86964109

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目的蛋白在N端，则转录从识别目的蛋白ATG开始，一直到标签蛋白才结束，则需要去掉目的蛋白的终止子，使标签蛋白的转录能继续，到遇到标签蛋白终止密码结束。除非标签蛋白前有独立的启动子，则可以不考虑。6 l# J& ~. I  B
而目的蛋白在C端，则标签蛋白在前起始转录，只要保证目的蛋白不移码，即可顺延转录，无需起始密码子，但必须保留终止密码，因为这次的转录截止在目的蛋白

mzaq2006

主要是看gene和tag的位置。如果是tag-gene，则gene上可以没有ATG，比如构建的是一个基因的部分序列，但是如果是一个基因的完整CDS，最好保留起始密码子ATG，这样才能保证gene的氨基酸不变。如果是gene-tag，因为是融合表达，所以gene上需要有ATG，因为启动子是从ATG开始其实翻译，而gene的终止密码子也要去掉，这样才能gene和tag都表达。在构建的时候特别需要注意读码框的问题。

zhangtcm

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$ W  z; p% u( t; u谢了

zhangtcm

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谢了