细胞是污染了吗？

倔强的投手

最近在做脂肪干细胞的诱导分化，铺板两天后细胞基本长满，然后加诱导分化培养基，第二天开始有些孔的细胞就开始大面积脱落。不知道是因为污染，还是其他的原因。如果说是因为污染，那有些孔又是好的，细胞分化的还不错
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上图，高手帮看看& z9 N; d5 G0 m+ t4 \$ f4 W& `
这个是正常生长的细胞
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这两张就是分化后脱落的细胞$ ]2 |0 {; S% T: R
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newjack920

诱导分化一般在细胞长至60%即可开始，长满再做肯定是不行的。

lzc

细胞状态确实不好了，感觉很久没处理了的一样，另外有些板确实会有问题，在传代后出现细胞的成片脱落，跟细胞的类型，细胞代数，板的质量，消化时间，吹打力度等很多因素相关。

倔强的投手

回复 mirrida 的帖子8 S; n+ o) d; v: g/ p* @9 I
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这个。。。应该不会吧，我们实验室用的L-Glu都是分装好零下20度保存，用的时候放四度融化，一直都是这样的，别人的细胞也没见出现这种情况啊。    关于细胞密度，之前倒是听说必须长满才能诱导，但每个人的做法还都不太一样，有的70-80%汇合就开始诱导了

mirrida

从第三张图看，我个人觉得是你的培养基时间放久了，谷氨酰胺过分降解导致的细胞边缘卷起。这应该和细胞分化是两回事。然后关于细胞密度的说法我有些不解，诱导事不是建议细胞铺满后再养2d，让细胞退出生长周期再诱导么？

倔强的投手

回复 加贝 的帖子
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但是如果污染的话，同一批的细胞应该都是这样的，同一个孔里面应该也都会污染。、
+ i% l9 B: ^6 a但我目前的情况是，并不是每个孔都这样的，而且同一个孔里面，也并不是所有的细胞都这样，只是有一部分脱落。 问别人，分析可能是板子里面落东西进去了，所以倒是细胞贴壁有问题，然后就飘起来，然后，就没有然后了。。。。

加贝

有些板子各个孔之间是有差异的，我遇到疑似污染首先会看培养基颜色是不是很快改变，其次是有没有肉眼可见的漂浮物，再就是高倍镜下观看是不是有一些小黑点在运动。一般的污染也就是细菌，霉菌，支原体污染，都很容易辨别的。个人建议：不能排除是污染造成的脱落情况下，细胞要迅速处理掉，避免污染其他的细胞。

倔强的投手

回复 elainecn 的帖子* H5 t$ N+ X5 B( @

6 y0 S5 R6 D& [5 e" S7 F我也怀疑过这个问题，因为有的板子就没有问题，而又得板子却大面积脱落

倔强的投手

回复 mkhorse 的帖子, M2 K% a6 O5 n5 ~$ y3 ^. u+ |
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培养基没什么变化的。从哪里看出来细胞状态老的，是不是太密了？

倔强的投手

回复 金戈 的帖子9 P' @( \8 ?: a! E

3 F# {- L5 k2 ?" H0 i) X) i其实密度可能还好了，因为前一次做的时候密度比这个还高，但是也没有脱落的问题。诱导液应该也没有问题，都是用一样的东西配的，只是每次配100ml，用完了再配，批次之间应该也没有那么大的差异。再做一次看看吧