请问各位克隆形成实验如何染色？

570505

用什么染料，具体如何操作？不加染料就不能看清楚吗？

yaolinzhang

可以用吉姆萨染色，根据说明

bio-bin

回复 yaolinzhang 的帖子
1 y0 V! l6 x, I. ?* E) D2 o( G/ A+ H* o8 f  A( M9 O6 T- x
请问吉姆萨染色可用于那些细胞的克隆形成实验？可否列出一些以供参考。谢谢！！
+ i! x& Y, k" f. ~+ u6 A

yaolinzhang

表皮干细胞

老姜

吉姆萨染色能染贴壁生长克隆的细胞，如果是造血细胞克隆仅能染细胞团表面的细胞，效果还不好。最近看文献有种CFSE染色，是荧光，细胞需要与荧光染料作用一定时间，有报道可用于造血细胞克隆的染色，可能可以将集落团内的细胞也染上。若做成了一定很壮观。

坏蛋蛋阿布

你要数克隆的话，可以考虑中性红来染色，效果也挺好的

570505

谢谢各位回答。但是我看文献上用结晶紫和MTT的比较多，这两种具体怎么操作呢？我怕没弄好把染料染错就毁了实验结果了。

YMM

回复 老姜 的帖子
& f3 l# Q" R0 s  ~+ M- v) H$ a
3 K* M8 o1 B0 p1 X; N1 X7 q您好，请问能否请教Single-cell cloning self-renewal assay和Colony-forming assay的具体操作方法呢？对此一无所知，请您不吝赐教，非常感谢

老姜

回复 YMM 的帖子
  |$ q7 \7 c+ k$ q# j, @8 g# N% y( f- `$ n# r* G/ y
单细胞克隆。。。实质就是细胞克隆法培养技术，所有培养专业书都有此技术描述。简言之，将对数生长期的细胞消化后10ml培养液里加约100-150个细胞，将细胞接种于96孔板中，8-16h后从96孔中挑出1个细胞/孔，标记该孔，进行培养每三天换液，直到这一个细胞长成一片（即克隆）则为单细胞克隆检测。! c0 U$ p  g: E6 T7 m' m$ J9 N
克隆形成检测可以在10cm皿中1接种500个/10ml 对数增殖期的细胞，按常规培养，月10-14天时计数有多少个细胞克隆，有公式可以计算出克隆形成率（实质是算出1000个细胞能有多少个具有形成克隆能力的细胞），司徒镇强的细胞培养书中有完整的描述。

老姜

回复 YMM 的帖子
9 T& _+ t3 i' y0 Y& @% n  A- u
# K4 E2 R8 J! T1 U单细胞克隆。。。实质就是细胞克隆法培养技术，所有培养专业书都有此技术描述。简言之，将对数生长期的细胞消化后10ml培养液里加约100-150个细胞，将细胞接种于96孔板中，8-16h后从96孔中挑出1个细胞/孔，标记该孔，进行培养每三天换液，直到这一个细胞长成一片（即克隆）则为单细胞克隆检测。
0 i, X7 ]- G- Z/ Z' p  r1 g- Z+ b克隆形成检测可以在10cm皿中1接种500个/10ml 对数增殖期的细胞，按常规培养，月10-14天时计数有多少个细胞克隆，有公式可以计算出克隆形成率（实质是算出1000个细胞能有多少个具有形成克隆能力的细胞），司徒镇强的细胞培养书中有完整的描述。