大鼠骨髓间充质培养求鉴定附图

老姜

回复 湖南干细胞 的帖子
* [9 L& y! X0 S, r+ Y$ a* w7 S5 U" e% b+ Q$ {
全骨髓发的大圆细胞多为破骨细胞等，一传代它因不被消化下来而自然淘汰了，不用纠结。上图似乎是含油脂的骨髓基质（也可以认为是黄骨髓的小粒——含血细胞很少）。在常规传代后这些细胞优胜劣汰自然会消失，随着传代次数的增加，成纤维样细胞进一步纯化。下图的圆形细胞应该不是成纤维样细胞，随着传代次数的增加，也会被淘汰，从而达到纯化的目的。你养的细胞很不错！

老姜

回复 湖南干细胞 的帖子2 X8 ]: s: ~" ]; U; y% E
5 \4 F' J/ Y4 c+ `- D2 I
骨髓间充质细胞的生长状态很受供者年龄的影响。消化细胞T25瓶用0.25%Trypsin 0.8ml量是多了，Trypsin对细胞的损上是大些，大鼠骨髓原代消化10min以上，不下来的细胞大多是破骨细胞之类的，完全可以弃之。人的细胞T25瓶用0.05%Trypsin-0.53mM的EDTA0.5ml消化3-5min效果就好，人的细胞“娇气”些。

老姜

回复 湖南干细胞 的帖子9 q" |; R. X, s' A

" f4 H: L2 s, r1 q  ]3 m左图看的不是太清楚，但右图是应该传代了，细胞接触再不传代细胞相互分泌钙使细胞粘连的紧，消化时细胞易成片脱落，不易打散为单个细胞，从而减少细胞的收获量。

老姜

回复 湖南干细胞 的帖子
) c* w6 }5 [8 h* |9 s+ w& K7 Y6 @
左图是不是一堆细胞周围的细胞稀疏？如果不是原代细胞生长成这样，是传代细胞长的太密，相互分泌钙不易打散或接种后细胞没有摇匀，使得分布不均所致。好像右图是它的高倍照射，若真是这样，也该消化了，明天再消化一样不易消化为单个核细胞——因为细胞相互接触的时间又长了。。。。
, G; v6 l! s5 @

老姜

回复 湖南干细胞 的帖子! G! u. B' q* S: G5 |$ O
7 w& ^# d* N9 \& H; D' ^8 s6 b% z6 n
有这种情况，未消化下来的细胞继续加培养液还能长。可它与已消化的细胞不同步了，因为稀疏的未消化细胞即使长成这种团，也很难铺满瓶，除了留更多未消化的细胞，这团中生长接触的细胞再养下去只会变老，相互粘连紧密，难以消化为单细胞，大多消化下来为片状，细胞收获量自然少。这细胞若要，现在就消化能收多少细胞算多少，收获的太少则弃之，太少没养的价值——耗时又耗精力。别为此纠结！