饲养层加fgf后，细胞形状变长，变细，培养液很脏

yuhaoze

回复 Jonathan 的帖子) y5 d1 r8 I# ~  u  Y: w
+ W# u; L  D/ k4 I- x& v+ G
我看您说的这套体系是用于 maintaining human ips and Es.0 P$ }6 p7 X7 @* L9 B- g
也可以诱导ips吗？

Jonathan

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' {% z, a; n8 F% ]9 `  P: x$ R1 M) f$ i# e$ L  X6 ~! I. ^
你说的ksr和普通血清的MEF，要养一段时间，就会发现MEF变细长，看起来好像营养不良的样子。然后培养基会有点脏，可能是因为死细胞多了，细胞碎片多的原因。因为KSR media里面是用血清替代物，所以养分不够。感染后的细胞，直接种在matrigel coated plate里面，开始两天可以用你原来细胞的培养基。第三天再换mTeSR1或者E8，或者conditioned media。我推荐前两个。

yuhaoze

怎么传不上图了呢

yuhaoze

回复 yuhaoze 的帖子; M- T( k; Y0 S$ G1 W4 l& ?& f3 I

% @1 }2 @) F5 \! j9 r图片/ i8 M+ s" L: W, Q' y% E

yuhaoze

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3 P7 ]. f# U4 w& ?& M; g8 x这是图片

yuhaoze

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( s/ m' ^* W9 H( R  z
8 f; |9 l2 G" ?; s' ?0 a我有matrigel，你说的铺完matrigel之后，就把感染完了的细胞接种上吗？
2 I: H& @) y# b& ]9 A/ P1 W0 c那培养液用的是ES完全培养液，还是conditioned培养液？
3 g$ l/ q% H/ z) I" L我试过了，KSR media培养的MEF，跟用普通血清培养的形态差不多，不过一旦加上fgf之后就变脏了。
$ X9 W: P% M" J

Jonathan

回复 yuhaoze 的帖子( n" Z/ @2 m7 ]" Q: b- G! S$ z

9 B/ {( l' V( sMEF变细长是因为你换了KSR media的原因，不是因为其中带了bfgf。一般是接种到MEF之后，隔1-2天换成KSR media，也就是普通的human ES standard media。你也可以试试用coat 了matrigel的6-well plate试一试，不用feeder，这个方法我试过N次，屡试不爽，很好用。

yuhaoze

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- @$ F9 c, x2 w, L" W6 x; ]6 c9 p  ?1 D
那诱导的时候，是将病毒感染后的细胞接种到MEF之后，第二天换带有fgf的ES培养液吗？还是过几天再换？

yuhaoze

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, q6 \6 E5 W7 W: a8 k$ W- {4 B  k+ r  j, _! Y. K4 r3 v- X
谢谢！

king8

问题不大，我也经常会碰到这样的现象